【目的】為了探討Kruppel樣因子15在大鼠腹膜間皮細(xì)胞衰老中的作用,本研究以TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠腹膜間皮細(xì)胞衰老為模型,來(lái)觀察KLF15的作用和可能的作用機(jī)制,我們使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染大鼠原代腹膜間皮細(xì)胞構(gòu)建細(xì)胞過(guò)表達(dá)KLF15干預(yù),隨后檢測(cè)各通路分子mRNA和蛋白的表達(dá)情況及對(duì)細(xì)胞衰老的影響。【方法】取SD雄性大鼠腸系膜、脾胃韌帶,分離培養(yǎng)原代大鼠腹膜間皮細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞鑒定。傳代培養(yǎng)至第三代作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。構(gòu)建真核過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-KLF15,分別用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pcDNA3.1(空載質(zhì)粒)和pcDNA3.1-KLF15(過(guò)表達(dá)質(zhì)粒)至大鼠腹膜間皮細(xì)胞,用Western Blot、Real-Time PCR檢測(cè)KLF15mRNA和蛋白的表達(dá)驗(yàn)證是否成功過(guò)表達(dá)KLF15。觀察TGF-β1干預(yù)的不同影響。實(shí)驗(yàn)分組:(1)對(duì)照組(control組);(2)空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(pcDNA3.1組);(3)KLF15過(guò)表達(dá)組(pcDNA3.1-KLF15組);(4)TGF-β1處理對(duì)照組(control+TGF-β1組);(5)TGF-β1處理空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組(pcDNA3.1組+...

【文章頁(yè)數(shù)】：64 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略語(yǔ)表
中文摘要
Abstract
前言
實(shí)驗(yàn)材料與方法
    1 實(shí)驗(yàn)主要試劑和耗材
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    1.原代大鼠腹膜間皮細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定
    2.大鼠KLF15全長(zhǎng)基因質(zhì)粒pcDNA3.1-KLF15的建構(gòu)和鑒定
    3.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后KLF15 mRNA和蛋白的表達(dá)情況
    4.TGF-β1刺激后Smad2、Smad3、p21mRNA的表達(dá)況
    5.TGF-β1刺激后p-Smad2/3、p21蛋白的表達(dá)情況
    6.TGF-β1刺激后細(xì)胞衰老β-半乳糖苷酶染色檢測(cè)細(xì)胞衰老情況
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3836149