發(fā)布時(shí)間：2023-06-28 05:12

　　目的探索人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)旁分泌物質(zhì)對實(shí)驗(yàn)性暴發(fā)性肝衰竭大鼠的治療作用,并研究其對大鼠肝細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 方法體外分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測UC-MSCs的表面標(biāo)志,制備含有UC-MSCs旁分泌物質(zhì)的條件培養(yǎng)基(MSC-CM),腹腔注射D-氨基半乳糖制備暴發(fā)性肝衰竭大鼠模型。實(shí)驗(yàn)分組：MSC-CM組、生理鹽水(NS)組和促肝細(xì)胞生長素(PHGF)組,在模型制備后24h從大鼠尾靜脈分別注射三組治療藥物。每組8只大鼠治療后12h、24h、36h、60h分別內(nèi)眥取血測定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和總膽紅素(TBIL)的含量。每組另取5只大鼠在治療后36h取肝臟組織制備切片進(jìn)行HE染色、PCNA免疫組織化學(xué)染色以及TUNEL染色,檢測大鼠肝組織中炎性細(xì)胞浸潤情況以及肝細(xì)胞增殖和凋亡的情況。并在無菌條件下取大鼠肝組織-80℃冷藏,提取RNA, RT-PCR法檢測大鼠肝組織由HGF、EGF、HB-EGF、TNF-a、OSM等基因的表達(dá)情況。同時(shí)取大鼠外周血,ELISA法檢測大...

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
略語/符號(hào)說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定
    1.1 對象和方法
        1.1.1 研究對象
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要溶液
        1.1.5 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、接種與培養(yǎng)
        1.1.6 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表面標(biāo)志
        1.1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 UC-MSCs體外生長情況及形態(tài)學(xué)觀察
        1.2.2 UC-MSCs免疫表型鑒定
    1.3 討論
        1.3.1 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞
        1.3.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定
        1.3.3 UC-MSCs與BM-MSCs生物學(xué)特性比較
        1.3.4 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的優(yōu)勢
    1.4 小結(jié)
二、人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)治療暴發(fā)性肝衰竭的實(shí)驗(yàn)研究
    2.1 對象和方法
        2.1.1 研究對象
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
        2.1.4 主要溶液
        2.1.5 暴發(fā)性肝衰竭(FHF)大鼠的制備
        2.1.6 暴發(fā)性肝衰竭(FHF)大鼠的治療
        2.1.7 ELISA法檢測大鼠血清中細(xì)胞因子表達(dá)情況
        2.1.8 大鼠肝組織蘇木素-伊紅(HE)染色
        2.1.9 大鼠肝組織增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)染色
        2.1.10 大鼠肝組織TUNEL染色
        2.1.11 RT-PCR檢測大鼠肝組織中基因表達(dá)情況
        2.1.12 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 FHF大鼠肝臟組織病理觀察
        2.2.2 臍帶MSC-CM對FHF大鼠肝功能的影響
        2.2.3 FHF大鼠血清中細(xì)胞因子檢測結(jié)果
        2.2.4 FHF大鼠肝臟病理改變
        2.2.5 FHF大鼠肝臟PCNA染色結(jié)果
        2.2.6 FHF大鼠肝臟TUNEL染色結(jié)果
        2.2.7 各組FHF大鼠基因表達(dá)結(jié)果
        2.2.8 三組大鼠生存分析結(jié)果
    2.3 討論
        2.3.1 D-GalN致大鼠FHF的原理
        2.3.2 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)
        2.3.3 MSC-CM對FHF大鼠肝功能的修復(fù)
        2.3.4 MSC-CM對FHF大鼠血清中細(xì)胞因子的影響
        2.3.5 MSC-CM對FHF大鼠肝組織病理改變情況
        2.3.6 MSC-CM對FHF大鼠肝細(xì)胞再生的影響
        2.3.7 MSC-CM對FHF大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響
        2.3.8 促肝細(xì)胞生長素(PHGF)
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞旁分泌物質(zhì)的作用及對肝功能衰竭的影響
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3836047