本文關(guān)鍵詞：乙肝丙肝PBMC中ZIP2和ZIP8的表達(dá)及HBV對(duì)THP-1中ZIP2和ZIP8表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：鋅是生物體所必須的微量元素之一,是機(jī)體多種酶的必需組分或激活因子,與機(jī)體發(fā)育、骨骼生長(zhǎng)、免疫功能、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)和核酸代謝等一系列生理活動(dòng)密切相關(guān)。鋅缺乏可以造成多系統(tǒng)的損害,鋅離子代謝的穩(wěn)態(tài)平衡對(duì)維持機(jī)體正常生理功能至關(guān)重要。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展,近年來(lái)已發(fā)現(xiàn)哺乳動(dòng)物中存在兩個(gè)重要鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族直接參與細(xì)胞內(nèi)鋅離子的穩(wěn)態(tài)代謝,即SLC39A (solute-linked carrier 39A, SLC39A)和SLC30A (solute-linked carrier 30A, SLC30A)兩大家族。SLC39A基因家族也被命名為ZIP (ZRT, IRT-like protein, ZIP)家族。而SLC30A基因家族又被稱ZnT (zinc transporter 1,ZnT)家族。SLC39A和SLC30A兩個(gè)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族分別參與了鋅離子轉(zhuǎn)進(jìn)和轉(zhuǎn)出細(xì)胞的運(yùn)輸過(guò)程。兩大家族鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在各種亞細(xì)胞器、細(xì)胞及器官中的分布不同,具有一定的組織特異性。越來(lái)越多的證據(jù)表明SLC39A 和 SLC30A兩大家族不僅直接參與了細(xì)胞的鋅離子穩(wěn)態(tài)代謝,同時(shí)還通過(guò)復(fù)雜的機(jī)制參與腫瘤和糖尿病等疾病的發(fā)生和發(fā)展,它們逐漸成為鋅營(yíng)養(yǎng)和代謝疾病的研究熱點(diǎn)。人類(lèi)ZIP2是首先被報(bào)道的哺乳動(dòng)物SLC39A家族成員。hZIP2組織表達(dá)較低且局限,僅在前列腺、子宮、子宮頸上皮、視神經(jīng)及單核細(xì)胞中表達(dá)。而用鋅螯合劑TPEN處理人THP-1單核細(xì)胞系或人外周血單核細(xì)胞造成缺鋅細(xì)胞模型,發(fā)現(xiàn)其hZIP2 mRNA表達(dá)明顯增加,提示人hZIP2轉(zhuǎn)錄表達(dá)受鋅離子調(diào)控。ZIP8與炎癥免疫關(guān)系密切。ZIP8表達(dá)下降可降低胞內(nèi)鋅含量,損害線粒體功能,從而引起細(xì)胞大量死亡。另外,ZIP8在人類(lèi)T細(xì)胞中表達(dá)較高,當(dāng)有外界刺激時(shí),T細(xì)胞中ZIP8表達(dá)明顯升高,該蛋白可通過(guò)調(diào)控鋅在溶酶體內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)從而調(diào)控T細(xì)胞γ-干擾素的表達(dá)。乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化以及其慢性持續(xù)感染的確切機(jī)制尚未完全明了,大多學(xué)者認(rèn)為宿主免疫系統(tǒng)與病毒相互作用這一因素是乙型肝炎病毒感染慢性化的重要原因。在HBV持續(xù)感染患者中,不能產(chǎn)生有效的針對(duì)HBV的特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞反應(yīng),從而不能有效的徹底清除HBV,是HBV感染慢性化、持續(xù)化的主要原因之一。近年來(lái)研究熱點(diǎn)逐漸趨向于天然免疫,有學(xué)者認(rèn)為人體天然免疫系統(tǒng)功能受損可能是引起乙型肝炎病毒感染慢性化的重要機(jī)制。由于在人感染HBV的自然史中,早期沒(méi)有臨床癥狀,且HBV需感染5-6周后方才進(jìn)入復(fù)制指數(shù)擴(kuò)增階段,故而很難去分析人感染HBV早期機(jī)體的天然免疫狀態(tài)。本課題檢測(cè)乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達(dá)及HBV對(duì)THP-1中ZIP2、ZIP8表達(dá)的影響分化的巨噬細(xì)胞,觀察HBV對(duì)其ZIP2、ZIP8表達(dá)的影響。研究目的：本課題檢測(cè)乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達(dá)；并用乙肝病毒血清將人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞(THP-1)分化的巨噬細(xì)胞進(jìn)行刺激,觀察HBV對(duì)其ZIP2、ZIP8表達(dá)的影響,以期了解HBV感染過(guò)程中ZIP2、ZIP8表達(dá)的變化,為HBV持續(xù)感染的分子免疫機(jī)制提供思路及理論基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)方法：一、臨床收集41例乙型肝炎患者、23例丙型肝炎患者以及39例正常人的抗凝外周血液樣本、原子吸收分光光度計(jì)檢測(cè)血清鋅含量、密度梯度離心法分離樣本的PBMC,通過(guò)Real-time PCR和Western-blot方法檢測(cè)PBMCs中鋅轉(zhuǎn)運(yùn)體ZIP2、ZIP8的表達(dá)。二、以不同乙肝病毒量血清刺激佛波酯(PMA)誘導(dǎo)的人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞(THP-1),實(shí)時(shí)定量PCR和Westera-blot檢測(cè)刺激24h和48h后巨噬細(xì)胞中ZIP2和ZIP8表達(dá),同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞因子IL-6和TNF-a的mRNA水平的變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：一.Real-time PCR和Western-blot結(jié)果顯示乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達(dá)量明顯低于正常對(duì)照組(p0.05)；不同病毒量的乙肝和丙肝患者之間相比,ZIP2和ZIP8的表達(dá)均沒(méi)有差異。二、不同乙肝病毒血清組巨噬細(xì)胞中ZIP2和ZIP8的表達(dá)在24h和48h較對(duì)照組上調(diào),且高病毒含量組表達(dá)高于低病毒含量組。刺激48h后,高乙肝血清病毒含量組IL-6的表達(dá)相比對(duì)照組以及低乙肝病毒血清含量組上調(diào),TNF-a的表達(dá)相比對(duì)照組以及低乙肝病毒血清含量組下調(diào)。結(jié)論：本研究在體內(nèi)外檢測(cè)了乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達(dá),結(jié)果顯示患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達(dá)下調(diào)；用不同HBV病毒量血清對(duì)巨噬細(xì)胞進(jìn)行刺激,巨噬細(xì)胞中ZIP2和ZIP8的表達(dá)反而上調(diào),并對(duì)細(xì)胞因子IL-6和TNF-α的表達(dá)也產(chǎn)生了一定的影響。
【關(guān)鍵詞】：ZIP2 ZIP8 乙肝 丙肝 THP-1
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R512.6
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 符號(hào)說(shuō)明12-14
• 前言14-19
• 材料與設(shè)備19-21
• 實(shí)驗(yàn)方法21-29
• 結(jié)果29-42
• 討論42-46
• 參考文獻(xiàn)46-53
• 致謝53-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文54-55
• 附件55

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1 劉立鵬;田智;粟敏;黃春霞;龍昱;羅sベ，

本文編號(hào)：381876