發(fā)布時間：2017-05-20 14:12

  本文關(guān)鍵詞：乙肝丙肝PBMC中ZIP2和ZIP8的表達及HBV對THP-1中ZIP2和ZIP8表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：鋅是生物體所必須的微量元素之一,是機體多種酶的必需組分或激活因子,與機體發(fā)育、骨骼生長、免疫功能、內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、蛋白質(zhì)和核酸代謝等一系列生理活動密切相關(guān)。鋅缺乏可以造成多系統(tǒng)的損害,鋅離子代謝的穩(wěn)態(tài)平衡對維持機體正常生理功能至關(guān)重要。隨著分子生物學技術(shù)的不斷發(fā)展,近年來已發(fā)現(xiàn)哺乳動物中存在兩個重要鋅轉(zhuǎn)運蛋白家族直接參與細胞內(nèi)鋅離子的穩(wěn)態(tài)代謝,即SLC39A (solute-linked carrier 39A, SLC39A)和SLC30A (solute-linked carrier 30A, SLC30A)兩大家族。SLC39A基因家族也被命名為ZIP (ZRT, IRT-like protein, ZIP)家族。而SLC30A基因家族又被稱ZnT (zinc transporter 1,ZnT)家族。SLC39A和SLC30A兩個轉(zhuǎn)運蛋白家族分別參與了鋅離子轉(zhuǎn)進和轉(zhuǎn)出細胞的運輸過程。兩大家族鋅轉(zhuǎn)運蛋白在各種亞細胞器、細胞及器官中的分布不同,具有一定的組織特異性。越來越多的證據(jù)表明SLC39A 和 SLC30A兩大家族不僅直接參與了細胞的鋅離子穩(wěn)態(tài)代謝,同時還通過復雜的機制參與腫瘤和糖尿病等疾病的發(fā)生和發(fā)展,它們逐漸成為鋅營養(yǎng)和代謝疾病的研究熱點。人類ZIP2是首先被報道的哺乳動物SLC39A家族成員。hZIP2組織表達較低且局限,僅在前列腺、子宮、子宮頸上皮、視神經(jīng)及單核細胞中表達。而用鋅螯合劑TPEN處理人THP-1單核細胞系或人外周血單核細胞造成缺鋅細胞模型,發(fā)現(xiàn)其hZIP2 mRNA表達明顯增加,提示人hZIP2轉(zhuǎn)錄表達受鋅離子調(diào)控。ZIP8與炎癥免疫關(guān)系密切。ZIP8表達下降可降低胞內(nèi)鋅含量,損害線粒體功能,從而引起細胞大量死亡。另外,ZIP8在人類T細胞中表達較高,當有外界刺激時,T細胞中ZIP8表達明顯升高,該蛋白可通過調(diào)控鋅在溶酶體內(nèi)的轉(zhuǎn)運從而調(diào)控T細胞γ-干擾素的表達。乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化以及其慢性持續(xù)感染的確切機制尚未完全明了,大多學者認為宿主免疫系統(tǒng)與病毒相互作用這一因素是乙型肝炎病毒感染慢性化的重要原因。在HBV持續(xù)感染患者中,不能產(chǎn)生有效的針對HBV的特異性細胞毒T淋巴細胞反應(yīng),從而不能有效的徹底清除HBV,是HBV感染慢性化、持續(xù)化的主要原因之一。近年來研究熱點逐漸趨向于天然免疫,有學者認為人體天然免疫系統(tǒng)功能受損可能是引起乙型肝炎病毒感染慢性化的重要機制。由于在人感染HBV的自然史中,早期沒有臨床癥狀,且HBV需感染5-6周后方才進入復制指數(shù)擴增階段,故而很難去分析人感染HBV早期機體的天然免疫狀態(tài)。本課題檢測乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達及HBV對THP-1中ZIP2、ZIP8表達的影響分化的巨噬細胞,觀察HBV對其ZIP2、ZIP8表達的影響。研究目的：本課題檢測乙肝丙肝患者PBMC中ZIP2和ZIP8的表達；并用乙肝病毒血清將人單核細胞白血病細胞(THP-1)分化的巨噬細胞進行刺激,觀察HBV對其ZIP2、ZIP8表達的影響,以期了解HBV感染過程中ZIP2、ZIP8表達的變化,為HBV持續(xù)感染的分子免疫機制提供思路及理論基礎(chǔ)。實驗方法：一、臨床收集41例乙型肝炎患者、23例丙型肝炎患者以及39例正常人的抗凝外周血液樣本、原子吸收分光光度計檢測血清鋅含量、密度梯度離心法分離樣本的PBMC,通過Real-time PCR和Western-blot方法檢測PBMCs中鋅轉(zhuǎn)運體ZIP2、ZIP8的表達。二、以不同乙肝病毒量血清刺激佛波酯(PMA)誘導的人單核細胞白血病細胞(THP-1),實時定量PCR和Westera-blot檢測刺激24h和48h后巨噬細胞中ZIP2和ZIP8表達,同時檢測細胞因子IL-6和TNF-a的mRNA水平的變化。實驗結(jié)果：一.Real-time PCR和Western-blot結(jié)果顯示乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達量明顯低于正常對照組(p0.05)；不同病毒量的乙肝和丙肝患者之間相比,ZIP2和ZIP8的表達均沒有差異。二、不同乙肝病毒血清組巨噬細胞中ZIP2和ZIP8的表達在24h和48h較對照組上調(diào),且高病毒含量組表達高于低病毒含量組。刺激48h后,高乙肝血清病毒含量組IL-6的表達相比對照組以及低乙肝病毒血清含量組上調(diào),TNF-a的表達相比對照組以及低乙肝病毒血清含量組下調(diào)。結(jié)論：本研究在體內(nèi)外檢測了乙型肝炎患者和丙型肝炎患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達,結(jié)果顯示患者PBMCs中ZIP2和ZIP8的表達下調(diào)；用不同HBV病毒量血清對巨噬細胞進行刺激,巨噬細胞中ZIP2和ZIP8的表達反而上調(diào),并對細胞因子IL-6和TNF-α的表達也產(chǎn)生了一定的影響。
【關(guān)鍵詞】：ZIP2 ZIP8 乙肝 丙肝 THP-1
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R512.6
【目錄】：

• 摘要6-9
• Abstract9-12
• 符號說明12-14
• 前言14-19
• 材料與設(shè)備19-21
• 實驗方法21-29
• 結(jié)果29-42
• 討論42-46
• 參考文獻46-53
• 致謝53-54
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術(shù)論文54-55
• 附件55

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