炎性腸病(Inflammatory Bowel Diseases,IBD)是以腸道炎癥和組織損傷為特征的炎癥,我國已有150萬病患。目前來說,IBD的發(fā)病機(jī)制不甚明了,有研究表明腸道上皮破損,腸道菌群入侵,還有巨噬細(xì)胞有關(guān)的免疫反應(yīng),都與此相關(guān)。實(shí)驗(yàn)室之前的研究表明結(jié)腸癌中腸道上皮細(xì)胞中C-反應(yīng)蛋白(C-Reactive Protein,CRP)啟動(dòng)子的-286位點(diǎn)出現(xiàn)高頻突變,因此我們懷疑CRP與腸道病變密切相關(guān),但具體的影響與作用機(jī)制目前尚不明確。于是我們構(gòu)建了腸道上皮高表達(dá)人CRP(IEC-huCRPtg)小鼠與CRP-KO小鼠,并使用葡聚糖硫酸鈉(Dextran Sulfate Sodium,DSS)誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)腸道CRP對(duì)疾病起促進(jìn)作用;隨后,我們發(fā)現(xiàn)CRP與細(xì)菌存在結(jié)合,且結(jié)合后的CRP不會(huì)隨糞便排出;最后,我們確認(rèn)了CRP是通過結(jié)合并影響腸道菌群,誘使部分細(xì)菌進(jìn)入腸道黏液層,從而干擾黏液層原有細(xì)菌的正常穩(wěn)態(tài),影響了黏液層的保護(hù)功能,使DSS誘導(dǎo)的急性IBD惡化。

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 炎癥性腸病
        1.1.1 IBD的發(fā)病機(jī)制
        1.1.2 來自腸道微生物群的抗原是IBD發(fā)生的起始
        1.1.3 腸粘膜功能的受損是IBD發(fā)生的前奏
        1.1.4 損傷情況下,腸黏膜中固有免疫應(yīng)答與獲得性免疫應(yīng)答共同惡化黏膜損傷
    1.2 腸道的結(jié)構(gòu)功能
        1.2.1 腸壁與腸上皮的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 腸上皮的重要作用
    1.3 腸道菌群與腸粘膜免疫屏障的關(guān)系
        1.3.1 人體對(duì)腸道菌群的調(diào)控功能
        1.3.2 腸道菌群對(duì)人體的調(diào)控功能
    1.4 CRP的研究現(xiàn)狀
        1.4.1 CRP的結(jié)構(gòu)
        1.4.2 CRP對(duì)腸道菌群的調(diào)控潛力
        1.4.3 CRP與炎癥
第2章 材料與方法
    2.1 研究對(duì)象
    2.2 實(shí)驗(yàn)試劑配制
        2.2.1 DNA提取試劑
        2.2.2 蛋白質(zhì)提取試劑
        2.2.3 酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)所用試劑
        2.2.4 蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)所用試劑
        2.2.5 IHC所用試劑
        2.2.6 流式細(xì)胞所用試劑
        2.2.7 引物表
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 使用2%DSS在 IEC-huCRPtg鼠中誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎
        2.3.2 小鼠鑒定
        2.3.3 使用Q-PCR在轉(zhuǎn)錄水平檢測基因表達(dá)
        2.3.4 翻譯水平檢測蛋白質(zhì)表達(dá)
        2.3.5 組織化學(xué)檢測
        2.3.6 腸道菌群的流式細(xì)胞術(shù)
        2.3.7 糞菌移植(FMT)與造模
第3章 結(jié)果與分析
    3.1 IEC-huCRPtg小鼠的繁育
        3.1.1 通過 Q-PCR 檢測,選取大腸 CRP 表達(dá)量最高的小鼠
        3.1.2 轉(zhuǎn)基因鼠基因型鑒定
        3.1.3 IEC-huCRPtg 鼠的腸道中 CRP 表達(dá)量顯著增加
    3.2 CRP-KO鼠的繁育
    3.3 IEC-huCRPtg+鼠急性 IBD 病情加重
        3.3.1 IEC-huCRPtg+鼠體重減輕程度加重
        3.3.2 IEC-huCRPtg+鼠結(jié)腸縮短加重
        3.3.3 IEC-huCRPtg+鼠炎癥因子表達(dá)上升幅度增加
        3.3.4 IEC-huCRPtg 鼠腸道破損更嚴(yán)重
        3.3.5 IEC-huCRPtg 鼠黏液層變薄更顯著
    3.4 CRP-KO鼠急性IBD病情減輕
        3.4.1 CRP-KO 鼠體重降低減輕
        3.4.2 CRP-KO 鼠大腸縮短減輕
        3.4.3 CRP-KO 鼠炎癥因子表達(dá)增加幅度減少
        3.4.4 CRP-KO 鼠結(jié)腸破損程度減輕
    3.5 IEC-huCRPtg鼠腸道環(huán)境檢測
        3.5.1 糞便中未檢出huCRP
        3.5.2 腸內(nèi)容物中存在 huCRP
        3.5.3 huCRP 表達(dá)于腸隱窩
    3.6 實(shí)驗(yàn)鼠腸道菌群檢測
        3.6.1 糞便菌群測序
        3.6.2 腸道菌群在小腸處與 CRP 存在結(jié)合
    3.7 CRP與sIg A存在互作
    3.8 腸道菌群與急性IBD關(guān)系的構(gòu)建
        3.8.1FMT實(shí)驗(yàn)
第4章 結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)
在學(xué)期間的研究成果
致謝



本文編號(hào)：3746384