目的:干細胞衰老是衰老相關疾病發(fā)生的基礎。隨著衰老的發(fā)生,老年人的腸道穩(wěn)態(tài)難以維持,腸道疾病如腸道腫瘤的發(fā)生率急劇增加,腸道受損后修復再生能力減弱,這表明衰老腸干細胞（Intestinal Stem Cells,ISCs）的核心功能發(fā)生改變。然而,目前對自然衰老過程中腸干細胞自我更新與分化等核心功能到底有何異常及其調(diào)控機制尚不清楚。本研究主要研究衰老腸干細胞自我更新與分化功能的作用,從而探索腸干細胞衰老的機制及其延緩衰老的途徑。方法:取24月齡（old）和2月齡（young）小鼠的全小腸進行隱窩分離,在標準培養(yǎng)體系中進行隱窩培養(yǎng)。分別于第7天和第10天觀察隱窩培養(yǎng)的表型、統(tǒng)計腸類器官的生長總量,并取培養(yǎng)第7天的ISCs通過qRT-PCR技術對ISCs分化基因（including Alpi、Atoh1、Defa24、Chga）表達水平及Wnt信號靶基因（Axin2、Ascl2）表達水平進行檢測。在第10天進行傳代培養(yǎng),以及傳代培養(yǎng)后第4天觀察隱窩培養(yǎng)表型、統(tǒng)計腸類器官生長總量。通過觀察隱窩培養(yǎng)的表型、腸類器官生長總量的統(tǒng)計及qRT-PCR結果分析衰老小鼠ISCs的分化功能,及與年輕小鼠I... 

【文章頁數(shù)】：44 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 基本材料
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 qRT-PCR引物序列
    2.2 實驗方法與步驟
        2.2.1 腸隱窩分離
        2.2.2 腸隱窩培養(yǎng)
        2.2.3 RNA的提取與c DNA的合成
        2.2.4 qRT-PCR
        2.2.5 統(tǒng)計學方法
第3章 結果
    3.1 衰老ISCs在標準培養(yǎng)體系培養(yǎng)
        3.1.1 老年小鼠ISCs在標準培養(yǎng)體系的原代培養(yǎng)
        3.1.2 老年小鼠ISCs在標準培養(yǎng)體系的傳代培養(yǎng)
        3.1.3 標準培養(yǎng)體系中老年小鼠ISCs的 Wnt信號水平
    3.2 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 后衰老ISCs的培養(yǎng)
        3.2.1 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 濃度后衰老ISCs的 Wnt信號水平
        3.2.2 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 濃度后衰老ISCs的原代培養(yǎng)
        3.2.3 降低培養(yǎng)體系中R-spondin-1 濃度后衰老ISCs的傳代培養(yǎng)
    3.3 在培養(yǎng)體系中添加Wnt3a后衰老ISCs的培養(yǎng)
第4章 討論
第5章 結論
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3730486