本文關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪性肝病大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥與PPARa的關(guān)系的實(shí)驗(yàn)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)是一種無過量飲酒史,以肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征。NAFLD已成為常見肝病之一,疾病譜隨病程的進(jìn)展表現(xiàn)不一,主要包括單純性脂肪肝(nonalcoholic simple fatty liver, NAFL)、脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis, NASH)、脂肪性肝纖維化和肝硬化。在NAFLD漫長的病程中,NASH是NAFL發(fā)生肝硬化的必經(jīng)階段。肥胖、Ⅱ型糖尿病、高脂血癥等單獨(dú)或共同構(gòu)成NAFLD的易感因素。但其發(fā)病機(jī)制至今仍存在爭議,尚未闡明；且目前尚無確切有效治的療藥物。研究發(fā)現(xiàn)NAFLD患者多伴有小腸細(xì)菌過度生長(Small Intestinal Bacteria Overgrowth SIBO), SIBO可以影響體內(nèi)脂質(zhì)代謝,增加肝臟脂質(zhì)沉積,對(duì)非酒精性脂肪肝的發(fā)生發(fā)展起到主要作用。 盡管研究發(fā)現(xiàn)非酒精性脂肪性肝病患者存在小腸細(xì)菌過度生長及腸源性內(nèi)毒素血癥(Intestinal endotoxemia IETM),但其在NAFLD中的具體作用機(jī)制及對(duì)機(jī)體脂質(zhì)代謝的影響機(jī)制尚未完全闡明。 過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activated receptors, PPARs)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,在肝臟的脂質(zhì)代謝過程中具有重要作用,且其亞型PPARa主要對(duì)肝臟脂肪酸及甘油三酯代謝進(jìn)行調(diào)控。因此腸源性內(nèi)毒素血癥是否可通過影響PPARa mRNA的表達(dá)來影響肝臟脂質(zhì)代謝有待進(jìn)一步驗(yàn)證,對(duì)它們之間關(guān)系的研究可能為非酒精性脂肪肝的防治提供了新的方向。 本實(shí)驗(yàn)研究了高脂飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝炎大鼠血清內(nèi)毒素水平的變化,及其肝組織PPARa mRNA的表達(dá),并給予具有調(diào)節(jié)腸道菌群作用的微生態(tài)制劑進(jìn)行干預(yù),觀察它對(duì)肝臟脂肪變和腸源性內(nèi)毒素血癥的作用,這對(duì)深入認(rèn)識(shí)NAFLD的發(fā)病機(jī)制具有重要意義,并為非酒精性脂肪肝提供了新的治療靶點(diǎn)。 目的： 1通過高脂飲食制作非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型；2探討腸源性內(nèi)毒素在NAFLD發(fā)病中的作用及其與PPARa的關(guān)系；3觀察微生態(tài)制劑對(duì)實(shí)驗(yàn)性NAFLD的治療效果,探討其可能的作用機(jī)制。 方法： 1制備動(dòng)物模型及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)： 32只雄性SD大鼠,體重180±20g克,適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為3組,正常對(duì)照組12只,給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)；造模組12只,治療組8只,均給予高脂飼料喂養(yǎng)(88%普通飼料+5%蛋黃粉+1%膽固醇+10%豬油)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均分籠(每籠4只)飼養(yǎng)于25±2℃、明暗各12h的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。自由飲水進(jìn)食,于喂飼12周末取對(duì)照組和模型組各4只處死,行肝組織HE染色確定大鼠非酒精性脂肪肝模型成功。自13周開始治療組給予雙歧桿菌三聯(lián)活菌腸溶膠囊(0.113g·kg-1·d-1)灌胃,對(duì)照組及模型組給予等容量蒸餾水灌胃。每周記錄動(dòng)物體重1次,根據(jù)體重變化調(diào)節(jié)灌胃計(jì)量,連續(xù)進(jìn)行至16周末給藥期結(jié)束,處死全部大鼠。 2指標(biāo)檢測： (1)觀察肝臟的大體情況,并完整切除肝臟,稱肝臟濕重(2)進(jìn)行肝組織切片的HE染色觀察肝臟病理變化(3)采用全自動(dòng)生化分析儀測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶,谷草轉(zhuǎn)氨酶,總膽固醇,甘油三酯,高密度脂蛋白水平。(4)鱟試劑法測定血清內(nèi)毒素水平(5)熒光定量PCR法檢測肝組織PPRAa mRNA基因水平的變化。 結(jié)果： 1給予高脂飲食的大鼠于喂飼12周末出現(xiàn)肝臟脂肪變及炎癥細(xì)胞浸潤,表明高脂飲食成功制造了NASH大鼠模型。 2大鼠體重、肝濕重及肝臟指數(shù)(肝濕重/體重×100%) 于12周末對(duì)部分大鼠肝組織行HE染色確定成功復(fù)制大鼠NASH模型。其余大鼠于16周末再次稱重,模型組大鼠的體重(570.85±13.41),肝重(19.81±2.47),肝指數(shù)(2.55+0.16%)均明顯高于正常對(duì)照組的體重(507.43±11.65)、肝重(12.91±0.78)及肝指數(shù)(3.48±0.46)(P值均0.01),有顯著性差異。與模型組相比,治療組體重(238.58士15.24)、肝重(15.37±1.23)及肝指數(shù)(2.93±0.22%)均明顯降低(P0.01),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3血清生化指標(biāo)： (1)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)：模型組AST為(204.88±18.22)較正常組(157.88±17.60)顯著增高(P0.01),而治療組AST為(183.00±18.47),較模型組下降(P0.05)。模型組ALT(71.00±8.73)較正常組(41.00±7.43)顯著增高(P0.01),而治療組ALT為(45.88±15.06)較模型組顯著下降(P值0.01) (2)血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL)：模型組血清TG為(0.60±0.08)較正常組(0.31±0.08)顯著升高(P0.01),治療組TG為(0.50±0.09)較模型組下降(P0.05)；模型組血清TC為(1.20±0.18)較正常組(0.68±0.16)顯著升高(P0.01),治療組TC為(1.02±0.17)較模型無顯著性差異(P均0.05)；模型組HDL(0.65±0.06)較正常組(0.82±0.08)顯著下降(P0.01),而治療組HDL為(0.73±0.06),較模型組有所上升(P均0.05)。 4血清內(nèi)毒素水平及肝組織PPARa mRNA表達(dá)水平 模型組血清內(nèi)毒素水平為(0.24±0.02)低于正常對(duì)照組(0.12±0.01)(P0.01),治療組血清內(nèi)毒素水平為(0.17±0.02)較造模組血清內(nèi)毒素水平明顯下降(P0.01)。 正常對(duì)照組大鼠肝組織高表達(dá)PPARamRNA (1.62±0.35);造模組肝組織PPARa mRNA表達(dá)(0.66±0.25)較正常對(duì)照組顯著減少(P0.01)；治療組PPARamRNA表達(dá)(0.10±0.23)較模型組有所增強(qiáng)(P0.05),但較正常組下調(diào)(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5肝臟病理學(xué)改變 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)對(duì)大鼠肝組織行HE染色正常組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)無脂肪變性,且均無炎癥細(xì)胞的浸潤；于光鏡下觀察模型組大鼠12周末肝組織可見彌漫性的肝細(xì)胞脂肪變性,伴有少量炎癥細(xì)胞浸潤。而后隨著造模時(shí)間的延長,脂肪變程度逐漸加重,于16周末脂肪變程度以重度為主,以中央靜脈周圍組織脂肪變最明顯,還可見到程度不等的小葉內(nèi)炎癥,匯管區(qū)炎癥及點(diǎn)灶狀壞死,與正常組相比有顯著性差異(P0.01)。與模型組相比,治療組肝細(xì)胞脂肪變性程度較模型組明顯改善(P0.01)；治療組炎癥分級(jí)較模型組無明顯改善(P0.01)。 結(jié)論： 1高脂飲食可成功建立大鼠NASH模型。 2小腸細(xì)菌過度生長及腸源性內(nèi)毒素在NAFLD發(fā)病過程中可能起到了重要作用,且內(nèi)毒素可能通過影響PPARa mRNA的表達(dá)對(duì)肝臟脂質(zhì)代謝進(jìn)行調(diào)節(jié),這一發(fā)現(xiàn)對(duì)深入認(rèn)識(shí)NAFLD的發(fā)病機(jī)制具有重要意義。 3微生態(tài)制劑可顯著減輕NAFLD大鼠肝細(xì)胞脂肪變,改善肝功能和血脂異常,降低PPARamRNA的表達(dá),對(duì)NASH能夠起到一定的治療作用。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 腸源性內(nèi)毒素血癥 PPARα 微生態(tài)制劑
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R575
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-13
• 前言13-14
• 材料與方法14-24
• 結(jié)果24-27
• 附圖27-32
• 附表32-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 綜述 腸道菌群與非酒精性脂肪性肝病的關(guān)系44-60
• 參考文獻(xiàn)52-60
• 致謝60-61
• 個(gè)人簡歷61

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：非酒精性脂肪性肝病大鼠腸源性內(nèi)毒素血癥與PPARa的關(guān)系的實(shí)驗(yàn)性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：366364