發(fā)布時(shí)間：2017-05-14 13:24

  本文關(guān)鍵詞：高脂飲食及小檗堿對(duì)非酒精性脂肪肝病幼鼠生長(zhǎng)及胰島素樣生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 1、研究胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)和胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)基因在非酒精性脂肪肝病細(xì)胞模型中的表達(dá)。 2、觀察小檗堿對(duì)非酒精性脂肪肝病細(xì)胞模型脂質(zhì)沉積和IGF-1、IGFBP-3表達(dá)的干預(yù)作用。 3、研究高脂飲食及小檗堿對(duì)幼鼠生長(zhǎng)及胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)表達(dá)的影響,闡明血清和肝臟組織1GF-1代謝紊亂與非酒精性脂肪肝病(NAFLD)幼鼠生長(zhǎng)遲緩的關(guān)系。 方法 1、用油酸誘導(dǎo)永生化人肝細(xì)胞(immortalized human hepatocyte,IHH)建立非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)細(xì)胞模型,油紅O染色和細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量檢測(cè)觀察細(xì)胞脂肪變情況。IHH細(xì)胞分為正常組,NAFLD組,其中正常組細(xì)胞以DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng),NAFLD組給予油酸0.5mmol/L處理72h,采用RT-PCR與Western-blotting和免疫熒光染色方法檢測(cè)IGF-1和IGFBP-3的表達(dá)變化。 2、將IHH細(xì)胞分為正常組,NAFLD組,小檗堿組,應(yīng)用RT-PCR、Western-blotting和免疫熒光染色法,檢測(cè)小檗堿干預(yù)后,肝細(xì)胞脂質(zhì)沉積及IGF-1、IGFBP-3mRNA和蛋白表達(dá)的變化。 3、21日齡SD雄性大鼠60只,隨機(jī)分成正常組(N)、脂肪肝組(NAFLD)、小檗堿組(Ber),無(wú)特定病原環(huán)境下飼養(yǎng)5周,測(cè)量幼鼠體重、鼻-尾長(zhǎng)度。行肝臟組織HE染色、血清生化指標(biāo)及肝臟組織甘油三酯(TG)含量檢測(cè)。確定高脂飲食誘導(dǎo)NAFLD幼鼠造模成功后,測(cè)定血清IGF-1及IGFBP-3的水平,采用RT-PCR與Western-blotting檢測(cè)肝臟IGF-1和IGFBP-3的mRNA和蛋白表達(dá)。 結(jié)果 0.5mmol/L由酸成功誘導(dǎo)IHH細(xì)胞脂肪變性,油紅O染色顯示細(xì)胞內(nèi)脂肪滴明顯增多,細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量從正常組的(150.2±15.58)(ug/mg protein)增加到(275.7±27.19)(ug/mg Protein)(P0.01).油酸誘導(dǎo)后,IHH細(xì)胞IGF-1、IGFBP-3mRNA及蛋白表達(dá)水平較正常組顯著下降(P0.01)。 經(jīng)10umol/L小檗堿干預(yù)后,油紅O染色顯示細(xì)胞內(nèi)脂肪滴減少,細(xì)胞內(nèi)甘油三酯含量從NAFLD組的(275.7±27.19)(ug/mg protein)下降到(236.1±21.68)(ug/mg protein)(P0.05)。小檗堿組IHH細(xì)胞IGF-1mRNA、IGFBP-3mRNA及蛋白表達(dá)水平較NAFLD組升高,基本恢復(fù)至正常組水平(P0.01)。 5周高脂飼料喂養(yǎng)后,HE染色結(jié)果顯示脂肪肝組幼鼠肝臟符合典型的NAFLD病理特征；與正常組相比,NAFLD組血清總膽固醇TC、血清高敏C反應(yīng)蛋白、ALT、肝臟組織TG含量均顯著升高(P0.01)。小檗堿干預(yù)后血清TC、ALT顯著下降(P0.01)。NAFLD組幼鼠體重、鼻-尾長(zhǎng)度較正常組增長(zhǎng)緩慢,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。小檗堿組幼鼠體重、鼻-尾長(zhǎng)度低于NAFLD組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。NAFLD組脛骨長(zhǎng)度和股骨長(zhǎng)比正常組有下降趨勢(shì),但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；NAFLD組股骨的骨密度和骨礦含量均低于正常組(P0.01)。小檗堿組幼鼠脛骨和股骨長(zhǎng)度與NAFLD組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),骨密度和骨礦含量較NAFLD組升高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。NAFLD組幼鼠血清IGF-1和IGFBP-3較正常組表達(dá)顯著下降(P0.01)；血清GH低于正常組,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；小檗堿干預(yù)后幼血清IGF-1與IGFBP-3表達(dá)較NAFLD組表達(dá)升高(P0.01)。 結(jié)論 1、證實(shí)非酒精性脂肪肝病細(xì)胞模型IGF-1和IGFBP-3的表達(dá)下降,為深入研究臨床上部分非酒精性脂肪肝病兒童身高受限的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 2、小檗堿具有提高非酒精性脂肪肝病細(xì)胞模型IGF-1、IGFBP-3表達(dá)的作用。 3、血清1GF-1濃度與大鼠鼻-尾長(zhǎng)度、體重呈正相關(guān),高脂飲食幼鼠生長(zhǎng)遲緩,可能與肝臟組織和血清1GF-1濃度減低有關(guān)。小檗堿干預(yù)后,對(duì)幼鼠體重、體長(zhǎng)無(wú)明顯的促進(jìn)作用,但具有提高幼鼠血清IGF-1和IGFBP-3的表達(dá)和改善幼鼠骨密度、骨礦物質(zhì)含量的作用。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪肝病 幼鼠 生長(zhǎng) 胰島素樣生長(zhǎng)因子 小檗堿
【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 英文~.略詞對(duì)照10-12
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述12-24
• 綜述一 胰島素樣生長(zhǎng)因子系統(tǒng)對(duì)生長(zhǎng)遲緩影響的機(jī)制研究進(jìn)展12-16
• 1 胰島素樣生長(zhǎng)因子系統(tǒng)的組成及功能12-13
• 2 IGFs的分泌異常與疾病的相關(guān)性13-14
• 3 現(xiàn)狀與展望14
• 參考文獻(xiàn)14-16
• 綜述二 中西醫(yī)對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子調(diào)控認(rèn)識(shí)的研究進(jìn)展16-24
• 1 胰島素樣生長(zhǎng)因子對(duì)多系統(tǒng)疾病的影響16-18
• 2 中醫(yī)藥對(duì)胰島素樣生長(zhǎng)因子的調(diào)控18-21
• 3 現(xiàn)狀與展望21
• 參考文獻(xiàn)21-24
• 實(shí)驗(yàn)研究24-52
• 實(shí)驗(yàn)一 非酒精性脂肪變性肝細(xì)胞模型的建立24-31
• 前言24
• 材料與方法24-27
• 結(jié)果27-30
• 討論30
• 參考文獻(xiàn)30-31
• 實(shí)驗(yàn)二 小檗堿對(duì)非酒精性脂肪變性肝細(xì)胞模型IGF-1、IGFBP-3的影響31-39
• 前言31
• 材料與方法31-34
• 結(jié)果34-37
• 討論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-39
• 實(shí)驗(yàn)三 高脂飲食及小檗堿對(duì)幼鼠生長(zhǎng)及胰島素樣生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響39-52
• 前言39-40
• 材料與方法40-43
• 結(jié)果43-46
• 討論46-49
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷53

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：365317