背景和目的慢性乙型病毒性肝炎是一種嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)病,全球目前約有3.5億慢性乙型肝炎病毒感染者；慢性丙型病毒性肝炎亦影響著全球近1.8億人,該病的危險(xiǎn)性主要在于其高慢性化率和可能發(fā)生的嚴(yán)重并發(fā)癥,包括肝硬化和肝癌。病毒性肝炎的防治是一個(gè)全球性公共衛(wèi)生問(wèn)題,已引起世界各國(guó)的關(guān)注。干擾素（interferon, IFN）是目前公認(rèn)的有效抗病毒藥物,迄今在臨床上已經(jīng)使用了20多年。然而,作為一個(gè)小分子蛋白,干擾素從血漿中清除的速度較快,其清除相半衰期為注射后的3～8h,24h后在血漿中就已檢測(cè)不到其存在,導(dǎo)致在臨床治療中需要重復(fù)多次給藥才能達(dá)到治療效果,造成臨床應(yīng)用中的一些不利。因此延長(zhǎng)IFNa的半衰期,降低其副作用對(duì)IFNa的臨床應(yīng)用具有重要意義。目前延長(zhǎng)干擾素半衰期的方法主要有聚乙二醇（PEG）修飾法、融合蛋白法。近年來(lái),人們關(guān)注抗體IgG Fc段與干擾素融合蛋白（IFN/Fc）的生物學(xué)活性和藥理作用。這兩種干擾素融合蛋白的研制受到國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注,作為一種新的基因工程藥物在表達(dá)系統(tǒng)建立和蛋白質(zhì)純化等方面進(jìn)行了前沿性研究。本課題基于近幾年蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)的研究進(jìn)展,通過(guò)分子克隆... 

【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一部分 重組桿狀病毒穿梭載體的構(gòu)建及桿粒的獲得
    1 材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 主要試劑/試劑盒
        1.3 主要培養(yǎng)基及液體試劑的配制
    2 方法
        2.1 重組穿梭載體pFastBac1-IFN/Fc的構(gòu)建
            2.1.1 引物設(shè)計(jì)
            2.1.2 細(xì)胞總RNA的提取
            2.1.3 IFNα2b及IgG4 Fc基因的擴(kuò)增
            2.1.4 目的基因克隆至表達(dá)載體pFastBac1
        2.2 重組桿粒Bacmid-IFN/Fc的獲得
            2.2.1 DH10 Bac感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.2.2 轉(zhuǎn)座重組
    3 結(jié)果
        3.1 重組穿梭載體pFastBac1-IFN/Fc的鑒定
            3.1.1 重組穿梭載體構(gòu)建
            3.1.2 重組穿梭載體pFastBac1-IFN/Fc的鑒定
        3.2 重組桿粒Bacmid-IFN/Fc的鑒定
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分 重組融合蛋白IFN/Fc在昆蟲(chóng)細(xì)胞中的表達(dá)與檢測(cè)
    1 材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 主要試劑/試劑盒
    2 方法
        2.1 重組桿狀病毒的獲得
            2.1.1 High Five細(xì)胞的培養(yǎng)及傳代
            2.1.2 重組桿粒Bacmid-IFN/Fc轉(zhuǎn)染High Five細(xì)胞
        2.2 融合蛋白IFN/Fc的表達(dá)與檢測(cè)
            2.2.1 融合蛋白IFN/Fc的獲得
            2.2.2 ELISA鑒定
            2.2.3 Western-Blot鑒定
            2.2.4 體外抗病毒活性測(cè)定
    3 結(jié)果
        3.1 重組桿狀病毒的包裝
        3.2 融合蛋白IFN/Fc的表達(dá)與檢測(cè)
            3.2.1 ELISA鑒定融合蛋白IFN/Fc
            3.2.2 Western-Blot鑒定融合蛋白IFN/Fc
            3.2.3 體外抗病毒活性測(cè)定
    4 討論
    5 結(jié)論
附圖
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
英文縮略詞表
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]干擾素在病毒性肝炎治療中的地位及前景[J]. 張定鳳.  中華肝臟病雜志. 2011 (01)
[2]干擾素在病毒性肝炎治療中的聯(lián)合應(yīng)用[J]. 趙鋼德,謝青.  中華肝臟病雜志. 2011 (01)
[3]Insect Cell Culture and Biotechnology[J]. Robert R.Granados,G.W.Blissard1.  Virologica Sinica. 2007(02)
[4]融合蛋白IFN-IgGFc在乳酸乳桿菌中的表達(dá)及其生物學(xué)活性研究[J]. 高緒文,陳輝,賈潤(rùn)清,姚立紅,馬長(zhǎng)偉,張智清.  食品科學(xué). 2007(01)



本文編號(hào)：3652719