本文關(guān)鍵詞：激活素A及其結(jié)合蛋白FS在刀豆球蛋白A誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：激活素（Activin）是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（Transforming growth factor-beta, TGF-β）信號(hào)分子超家族的一種分泌蛋白，在多種組織器官的分化及細(xì)胞的增殖和凋亡的調(diào)控中發(fā)揮重要的作用。激活素結(jié)合蛋白——卵泡抑素（Follistatin,FS）通過與激活素結(jié)合，參與調(diào)節(jié)激活素的多種生物學(xué)效應(yīng)。本研究建立在刀豆球蛋白A（Concanavalin A,ConA）誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型基礎(chǔ)上，通過轉(zhuǎn)氨酶檢測(cè)，組織病理觀察，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）、RT-PCR（Reverse transcription,PCR）以及免疫組織化學(xué)等技術(shù)方法和手段，研究激活素（Activin A）及其結(jié)合蛋白FS在ConA誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及作用，為肝損傷的防治及治療提供新的思路。 一、ConA誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷模型制備 實(shí)驗(yàn)用C57BL/6純系小鼠，尾靜脈給予ConA15mg/kg體重誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷，在給藥后的1d、3d、5d及7d收集血清和肝組織。HE染色病理分析顯示，ConA注射小鼠1d，肝組織有多處壞死灶，其中可見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉正常結(jié)構(gòu)和肝細(xì)胞索消失，血清轉(zhuǎn)氨酶水平也最高。3d時(shí)損傷部位面積減少，損傷肝組織可見大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，血清轉(zhuǎn)氨酶仍相對(duì)較高。5d時(shí)肝小葉結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)，部分壞死區(qū)還可見淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，7d時(shí)基本接近正常肝組織，同時(shí)血清轉(zhuǎn)氨酶也基本降至正常水平。以上表明，本研究成功建立了ConA誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型。 二、急性肝損傷模型鼠血清、肝組織中ActivinA、ActRIIA、FS的表達(dá) ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，血清中Activin A水平在Con A給藥后1d達(dá)到最高，隨后逐漸下降，7d時(shí)已基本恢復(fù)至正常，而FS水平在損傷后3d及5d升高明顯，7d仍維持較高水平。PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，模型鼠肝組織ActivinA與ActRIIAmRNA轉(zhuǎn)錄水平呈平行狀態(tài)，與血清Activin A蛋白水平變化一致。FS mRNA轉(zhuǎn)錄水平也在Con A給藥后3d明顯升高。免疫組織化學(xué)染色顯示Activin A在正常肝組織中僅在肝實(shí)質(zhì)區(qū)有少量表達(dá)，在ConA誘導(dǎo)肝損傷1d后肝細(xì)胞大量表達(dá)，3d后表達(dá)量明顯下降，ActRIIA表達(dá)水平和Activin A相似。肝組織FS蛋白表達(dá)在損傷3d時(shí)也在升高明顯，5d及7d維持在較高水平。提示Activin A可能參與Con A誘導(dǎo)急性肝損傷早期作用，而FS則可能參與肝損傷修復(fù)過程。 三、體內(nèi)注射FS中和內(nèi)源性激活素A作用對(duì)肝損傷的影響 通過尾靜脈注射FS中和ActivinA的作用，明確ActivinA與FS在ConA誘導(dǎo)急性肝損傷中的作用。實(shí)驗(yàn)將C57BL/6小鼠隨機(jī)分為4組，分別為正常對(duì)照組，F(xiàn)S組，ConA損傷組，ConA+FS組。尾靜脈給予ConA1d后處死小鼠，檢測(cè)血清轉(zhuǎn)氨酶水平，結(jié)果顯示ConA+FS治療組血清轉(zhuǎn)氨酶ALT及AST水平明顯低于ConA損傷組，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異明顯（p＜0.01）。HE染色顯示ConA+FS組損傷灶與單純ConA組比明顯減少，且肝指數(shù)也相對(duì)較高。 四、Smad3基因Knock-down對(duì)模型鼠肝損傷病理進(jìn)程的影響 通過轉(zhuǎn)染Smad3-shRNA敲低Smad3基因，，進(jìn)一步觀察阻斷激活素信號(hào)傳導(dǎo)，對(duì)肝損傷影響。實(shí)驗(yàn)設(shè)pGCsi-U6/Neo-Smad3shRNA和pGCsi-U6/Neo質(zhì)粒對(duì)照組，ConA+pGCsi-U6/Neo和ConA+pGCsi-U6/Neo-Smad3shRNA實(shí)驗(yàn)組。小鼠尾靜脈注射質(zhì)粒24h后再注射ConA誘導(dǎo)急性肝損傷。于ConA注射1d后取小鼠血清，采用ELISA法檢測(cè)血清中ActivinA及FS蛋白水平，結(jié)果顯示，尾靜脈注射ConA+pGCsi-U6/Neo-Smad3shRNA組血清轉(zhuǎn)氨酶水平明顯低于ConA+pGCsi-U6/Neo組；病理組織切片也顯示ConA+pGCsi-U6/Neo-Smad3shRNA組肝細(xì)胞形態(tài)和肝小葉病變較輕。 上述結(jié)果表明，ActivinA與激活素結(jié)合蛋白FS參與了ConA誘導(dǎo)的肝損傷及損傷修復(fù)過程，阻斷ActivinA作用或干擾其信號(hào)傳導(dǎo)，對(duì)ConA誘導(dǎo)的肝損傷均具有保護(hù)和治療作用。
【關(guān)鍵詞】：急性肝損傷 刀豆球蛋白A 激活素A 激活素結(jié)合蛋白
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R575;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第1章 文獻(xiàn)回顧12-20
• 1.1 肝損傷研究介紹12-15
• 1.1.1 肝損傷研究背景12
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)性肝損傷模型12-13
• 1.1.3 Con A 誘導(dǎo)的肝損傷模型13-15
• 1.2 激活素與肝臟15-17
• 1.2.1 激活素信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制15-16
• 1.2.2 激活素 A 與肝臟疾病16-17
• 1.3 FS 與肝臟17-18
• 1.3.1 FS 的結(jié)構(gòu)與合成17-18
• 1.3.2 FS 與肝臟疾病18
• 1.4 本課題研究目的和內(nèi)容18-20
• 第2章 材料與方法20-27
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)相關(guān)試劑20
• 2.3 實(shí)驗(yàn)試劑配置20-21
• 2.4 實(shí)驗(yàn)儀器21
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法21-27
• 2.5.1 Con A 誘導(dǎo)的急性肝損傷模型21-25
• 2.5.2 FS 中和實(shí)驗(yàn)25
• 2.5.3 Smad3 基因 Konck-down25-26
• 2.5.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析26-27
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果27-39
• 3.1 Con A 誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型27-29
• 3.1.1 肝損傷模型大體標(biāo)本27
• 3.1.2 病理組織切片 HE 染色27-28
• 3.1.3 Con A 急性損傷模型小鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平變化28-29
• 3.2 Activin A、ActRIIA、FS 在急性肝損傷模型中的表達(dá)29-34
• 3.2.1 急性肝損傷模型血清中 Activin A、FS 蛋白水平29-30
• 3.2.2 肝損傷模型組織中 Activin A、ActRIIA 及 FS mRNA 的動(dòng)態(tài)表達(dá)30-32
• 3.2.3 模型病理組織切片免疫組織化學(xué)染色32-34
• 3.3 FS 中和實(shí)驗(yàn)對(duì)肝損傷的影響34-36
• 3.3.1 模型鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平變化34
• 3.3.2 HE 染色觀察肝組織病理改變34-35
• 3.3.3 肝臟指數(shù)35-36
• 3.4 Smad3 基因 Konck-down 對(duì)肝損傷的影響36-39
• 3.4.1 模型鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平變化36-37
• 3.4.2 HE 染色觀察肝組織病理改變37-38
• 3.4.3 肝臟指數(shù)38-39
• 第4章 討論39-43
• 4.1 Activin A、ActRIIA、FS 在 Con A 肝損傷模型中的表達(dá)39-40
• 4.2 FS 中和實(shí)驗(yàn)對(duì)肝損傷的影響40-41
• 4.3 Smad3 基因 Knock-down 對(duì)肝損傷的影響41-43
• 第5章 結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果49-50
• 致謝50

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張紅軍;柳忠輝;馬迪;陳芳芳;臺(tái)桂香;;激活素A及其ⅡA型受體在小鼠肝損傷模型肝組織中的表達(dá)[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年03期

2 ;Hepatoprotective role of ganoderma lucidum polysaccharide against BCG-induced immune liver injury in mice[J];World Journal of Gastroenterology;2002年04期

  本文關(guān)鍵詞：激活素A及其結(jié)合蛋白FS在刀豆球蛋白A誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷中的表達(dá)及作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：361545