發(fā)布時(shí)間：2017-05-13 04:02

  本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)炎癥性腸病小鼠模型的治療作用及移植相關(guān)問(wèn)題探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：采用TNBS構(gòu)建炎癥性腸病小鼠動(dòng)物模型，探討人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（hUC-MSCs）對(duì)TNBS誘導(dǎo)的炎癥性腸病小鼠模型的治療作用及可能的機(jī)理，以及細(xì)胞輸注途徑、細(xì)胞數(shù)量等移植相關(guān)問(wèn)題對(duì)療效的影響，以期獲得臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療炎癥性腸病的臨床前研究數(shù)據(jù)。 方法：一、炎癥性腸病小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建：采用單次灌腸及皮膚致敏聯(lián)合灌腸兩種方法，55只SPF雄性BALB/c小鼠隨機(jī)分為7組，包括對(duì)照組、不同劑量TNBS單次灌腸組（100、150、175、200、225mg/kg）及皮膚致敏聯(lián)合灌腸組。各組于造模后5天取材，觀察結(jié)腸大體形態(tài)并評(píng)分；取病變處進(jìn)行石蠟包埋切片，HE染色，并進(jìn)行病理組織學(xué)評(píng)分。根據(jù)動(dòng)物體重變化、死亡率、大體評(píng)分及病理組織學(xué)評(píng)分結(jié)果，篩選最佳的模型制備方法。二、hUC-MSCs對(duì)炎癥性腸病小鼠模型的治療作用研究。采用皮膚致敏聯(lián)合灌腸制備炎癥性腸病小鼠模型，觀察hUC-MSCs輸注對(duì)腸道損傷的治療作用，根據(jù)動(dòng)物的生存率，體重變化，大體評(píng)分和病理評(píng)分進(jìn)行療效評(píng)價(jià)。并檢測(cè)血清中炎癥因子IL-10，IL-6，TNF-α，IFN-γ的含量，以及應(yīng)用CFSE標(biāo)記和人抗核抗體免疫熒光檢測(cè)hUC-MSCs在腸道的植入和存活，初步探討hUC-MSCs治療炎癥性腸病小鼠模型的可能機(jī)理。三、hUC-MSCs治療炎癥性腸病小鼠模型移植相關(guān)問(wèn)題探討。1、不同移植途徑比較：hUC-MSCs分別經(jīng)尾靜脈和腹腔兩種不同途徑移植入體內(nèi)，觀察療效的差異，觀察指標(biāo)包括生存率，體重變化，大體評(píng)分和病理評(píng)分。2.不同移植細(xì)胞數(shù)量比較：灌腸后小鼠隨機(jī)分為5組，包括對(duì)照組、不同劑量hUC-MSCs組（2×10~4、6×10~4、2×10~5、6×10~5/只），，各組于移植后觀察生存率和體重的變化。 結(jié)果：一、單次灌腸和皮膚致敏聯(lián)合灌腸制備炎癥性腸病小鼠模型：100、150mg/kgTNBS單次灌腸組動(dòng)物未見(jiàn)到明顯的潰瘍形成；其余劑量組動(dòng)物均有不同程度的潰瘍形成，造模成功率與劑量成正比，其中225mg/kg誘導(dǎo)組動(dòng)物成模率為100%，但病變較重、病變不均一且偶有小鼠眼睛失明的副作用出現(xiàn)。皮膚致敏聯(lián)合灌腸組動(dòng)物均有潰瘍形成，造模成功率100%，病變適中且未發(fā)現(xiàn)小鼠眼睛失明的副作用。表明皮膚致敏聯(lián)合灌腸是制備TNBS誘導(dǎo)的炎癥性腸病小鼠模型的最佳方法。二、hUC-MSCs對(duì)炎癥性腸病小鼠模型具有明顯的治療效果。hUC-MSCs經(jīng)尾靜脈移植后可以歸巢到腸道，降低受損結(jié)腸組織大體和病理評(píng)分，并且可以改善小鼠生存率。hUC-MSCs移植可下調(diào)血清中炎癥因子IL-6，IFN-γ，TNF-α含量，上調(diào)抑炎因子IL-10的含量。三、不同途徑、不同細(xì)胞數(shù)量移植hUC-MSCs對(duì)炎癥性腸病小鼠模型的治療作用有差異。尾靜脈和腹腔輸注hUC-MSCs均可以降低受損結(jié)腸組織大體和病理評(píng)分，但在改善生存率方面腹腔移植途徑要優(yōu)于尾靜脈移植途徑；而尾靜脈移植的潰瘍修復(fù)效果優(yōu)于腹腔移植。hUC-MSCs細(xì)胞數(shù)量過(guò)高或過(guò)低均不能有效改善小鼠生存率變化和體重變化，只有在合適的范圍內(nèi)才能發(fā)揮治療效果。 結(jié)論：175mg/kg～225mg/kgTNBS單次灌腸及皮膚致敏聯(lián)合TNBS灌腸均可制備小鼠炎癥性腸病模型；皮膚致敏聯(lián)合TNBS灌腸制備的炎癥性腸病模型造模成功率高，病變適中，模型穩(wěn)定；hUC-MSCs對(duì)TNBS誘導(dǎo)的炎癥性腸病小鼠模型有治療作用，移植后可以歸巢到腸道；腹腔注射和尾靜脈移植hUC-MSC對(duì)IBD小鼠模型均有治療作用，尾靜脈移植的潰瘍修復(fù)效果優(yōu)于腹腔移植；腹腔輸注hUC-MSCs在改善生存率方面優(yōu)于尾靜脈移植；細(xì)胞數(shù)量對(duì)hUC-MSC治療的療效有影響，過(guò)高或過(guò)低的細(xì)胞量均不能有效產(chǎn)生治療效果。但最佳細(xì)胞數(shù)量仍需通過(guò)進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量以進(jìn)行確認(rèn)。
【關(guān)鍵詞】：間充質(zhì)干細(xì)胞 臍帶 炎癥性腸病 克羅恩病 潰瘍性結(jié)腸炎
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R-332;R574
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 參考文獻(xiàn)13-15
• 第一部分 炎癥性腸病小鼠模型的建立及其影響因素的探討15-27
• 材料與方法16-19
• 結(jié)果19-23
• 討論23-25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二部分 人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)炎癥性腸病小鼠模型的治療作用及移植相關(guān)問(wèn)題探討27-52
• 材料與方法28-33
• 結(jié)果33-44
• 討論44-48
• 參考文獻(xiàn)48-52
• 結(jié)論52-53
• 附錄53
• 碩士研究生期間承擔(dān)課題53
• 論文發(fā)表情況53-54
• 致謝54-56
• 綜述56-62
• 參考文獻(xiàn)61-62

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張堅(jiān);朱維銘;龔劍峰;張偉;李寧;黎介壽;;基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)放射性腸損傷的修復(fù)作用[J];腸外與腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng);2008年03期

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本文編號(hào)：361496