本文關(guān)鍵詞：口服脂肪酶改善高脂性模型大鼠的血甘油三酯和脂肪肝，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 高脂性脂肪肝是指肝臟內(nèi)脂肪堆積過(guò)多所形成的臨床病理綜合癥,是由多種原因誘導(dǎo)引起肝臟脂肪代謝紊亂。肝細(xì)胞攝取脂肪增加而氧化分解減少,常伴有血脂代謝異常[35,40]。在我國(guó),隨著人們生活水平的提高和飲食結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變,其發(fā)病率也逐年上升且逐漸低齡化,目前脂肪肝的發(fā)病率約為30.7%。脂肪肝發(fā)病原因復(fù)雜,包括藥物、營(yíng)養(yǎng)失調(diào)、代謝性疾病和飲酒過(guò)度等,可由一種病因引起,也可由多種病因同時(shí)作用或先后參與。脂肪肝分為7類,最常見(jiàn)的包括高脂性脂肪肝和非酒精性脂肪肝。如果沒(méi)有得到及時(shí)的治療很可能逐漸發(fā)展為多種并發(fā)癥,有研究表明脂肪肝患者肝纖維化的發(fā)生率高達(dá)25%,且約1.5%-8.0%的患者可進(jìn)展為肝硬化[8],其它還包括脂肪性肝炎、肝衰竭末期以及肝癌[41]。因此高脂性脂肪肝的預(yù)防和治療已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。 良好的高脂血癥脂肪肝模型是開(kāi)展診療的基礎(chǔ)和前提。目前常見(jiàn)的動(dòng)物模型主要有大鼠、小鼠、鶴鶉和家兔等,其中以小鼠和大鼠脂肪肝模型較為常見(jiàn)[41]。目前,建立高脂血癥脂肪肝動(dòng)物模型的方法可分為兩種,一種是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)來(lái)造模,其中大部分模型不同于人類高脂血癥脂肪肝的發(fā)病機(jī)制及演變過(guò)程；另外一種是利用高脂飲食來(lái)誘導(dǎo)建模,例如高脂乳劑造模法和高脂飼料造模法。高脂飲食這種高熱量飲食建立的模型與人類較為接近,但耗時(shí)費(fèi)力,成功率有限。本研究在對(duì)常見(jiàn)的四種不同造模方法進(jìn)行比較的基礎(chǔ)上,摸索建立更接近人類高脂血癥的脂肪肝大鼠模型。 高脂血癥脂肪肝的治療原則包括祛除病因、調(diào)整飲食和藥物治療等。臨床常用的降脂藥物有膽酸整合劑、HMG—CoA還原酶抑制劑、煙酸及其衍生物等,這些藥物雖能在一些病人中能有效降低血脂,但不能很好地清除肝臟中沉積的脂肪,且有一定的肝毒性,常停藥后反彈[5，6],故開(kāi)發(fā)新型有效的降脂藥物變得尤其重要。 脂肪酶是一種酯鍵水解酶,它作用于甘油三酯的酯鍵,使甘油三酯降解為甘油二酯、單甘油酯、甘油和脂肪酸[29-30]。脂肪酶產(chǎn)品也有助于治療生理或病理情況下(胰腺切除等)的消化不良等；且有效地提高豬、雞、鴨和魚(yú)等在生長(zhǎng)過(guò)程中對(duì)于脂肪的吸收和利用,提高動(dòng)物飼糧中能量的利用率,同時(shí)補(bǔ)充部分必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如必需脂肪酸、脂溶性維生素等[7-8,26-28]。近年來(lái),脂肪酶對(duì)血脂等代謝的影響也引起關(guān)注,王毅等報(bào)到擴(kuò)展青霉脂肪酶具有預(yù)防血脂升高和改善血液流變性的作用[9];曹蘋(píng)等發(fā)現(xiàn)脂肪酶能有效降低大鼠體重和肝重指數(shù),明顯降低模型組大鼠血清TGTC含量及肝內(nèi)脂肪沉積,改善肝細(xì)胞的脂肪性病變[10]。 本課題以大鼠為主要研究對(duì)象,從以下幾個(gè)方面展開(kāi)研究： 1.在比較4種常用的大鼠高脂性脂肪肝模型造模方法基礎(chǔ)上,建立高效和穩(wěn)定的改良型造模方法。通過(guò)檢測(cè)大鼠血脂四項(xiàng)水平和病理切片,驗(yàn)證該大鼠脂肪肝建模方法。 2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)觀察脂肪酶的降血脂作用：應(yīng)用脂肪酶治療高脂乳劑誘導(dǎo)的大鼠高脂性脂肪肝模型。分別通過(guò)檢測(cè)血脂TG、TC、HDL-C和LDL-C,觀察肝臟組織切片HE染色和油紅O染色等方法,并與臨床治療藥物易善復(fù)效果對(duì)照,評(píng)判脂肪酶的降血脂作用。 目的 本課題旨在建立大鼠高脂性脂肪肝動(dòng)物模型的建模新方法,并進(jìn)一步觀察口服脂肪酶對(duì)高脂誘導(dǎo)脂肪肝大鼠模型的血脂代謝作用,以及對(duì)脂肪肝的形態(tài) 學(xué)改變。 方法 (1)通過(guò)采用4種不同的脂肪肝動(dòng)物模型造模方法,分別為高脂飼料①、高脂飼料②、高脂乳劑①和高脂乳劑②,飼喂SD大鼠進(jìn)行建模。期間依據(jù)大鼠血清甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL-C)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平以及觀察對(duì)比肝臟的病理切片染色變化,篩選出高效穩(wěn)定的高脂血癥模型造模方法。 (2)復(fù)制高脂乳劑②所造模型動(dòng)物,檢測(cè)大鼠血脂及肝脂肪水平,進(jìn)一步確實(shí)大鼠高脂性脂肪肝模型構(gòu)造成功。將所造模型隨機(jī)分為3組,并分別用脂肪酶(劑量8060U·kg-1BW),易善復(fù)(15Omg·kg-1BW,陽(yáng)性藥物組)和羥甲基纖維素(陰性對(duì)照組)喂養(yǎng),每10d記錄體重,并采血檢測(cè)大鼠TG、TC、HDL-C和LDL-C水平,30d后觀察大鼠肝臟組織切片,并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果 (1)造模3W后,正常大鼠組血脂中TG水平為(0.63±0.08rmmol/L),模型組Ⅰ血脂中TG水平為(0.59±0.11mmol/L),模型組Ⅱ血脂中TG水平為(1.00±0.23mmol/L),模型組Ⅲ血脂中TG水平為(0.55±0.08mmol/L),模型組Ⅳ血脂中TG水平為(1.61±0.31mmol/L)；其中采用高脂乳劑②(10%膽固醇,30%豬油,2%膽酸鈉,10%吐溫80,10%1,2-丙二醇和0.5%丙硫氧嘧啶)喂養(yǎng)的模型組Ⅳ血脂TG平均值達(dá)(1.61±0.31]mmol/L),高于正常大鼠組血脂TG(0.63±0.08mmol/L)和高脂飼料②所造模型組Ⅱ TG(1.00±0.23mmol/L)(p0.05)；而高脂飼料①和高脂乳劑①分別所造模型組Ⅰ和模型組Ⅲ中血脂TG為(0.59±0.11mmol/L)和(0.55±0.08mmol/L)與正常大鼠組血脂TG(0.63±0.08mmol/L)無(wú)顯著性差異(p0.05)。造模3W后,正常大鼠組血脂中TC水平為(1.4±0.09mmol/L),模型組Ⅰ血脂中TC水平為(1.45±0.04mmol/L),模型組Ⅱ血脂中TC水平為(2.35±0.23mmol/L),模型組Ⅲ血脂中TC水平為(1.32±0.14mmol/L),模型組Ⅳ血脂中TC水平為(6.34±0.53mmol/L);模型組Ⅱ血脂TC(2.35±0.23mmol/L),模型組Ⅳ血脂TC (6.34±0.53mmol/L)明顯高于正常大鼠組血脂TC(1.4±0.09mmol/L)(p0.05)；其他兩組TC與正常大鼠組血脂對(duì)比,沒(méi)有顯著性差異(p＞0.05)；模型組Ⅱ血脂四項(xiàng)中TC(2.35±0.23mmol/L)在統(tǒng)計(jì)學(xué)方面明顯比模型Ⅳ組血脂TC(6.34±0.53mmol/L)低(p0.05)。且大鼠肝臟脂肪滴現(xiàn)象明顯,相比傳統(tǒng)造模方法,高脂乳劑②能在較短時(shí)間建立較穩(wěn)定的高脂性脂肪肝模型。即高脂乳劑②可建立穩(wěn)定的高脂性脂肪肝模型動(dòng)物。 (2)給予藥物飼喂動(dòng)物10d后,正常大鼠組TG為(0.61±0.14mmol/L),模型組TG為(1.63±0.22mmol/L),易善復(fù)組TG為(1.25±0.29nmol/L),脂肪酶組TG為(1.47±0.32mmol/L);其中脂肪酶組TG開(kāi)始下降,比模型組(1.63±0.22mmol/L)低,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)；30d后,脂肪酶組血脂TG(0.81±0.25mmol/L)明顯低于模型組血脂TG(1.22±0.34mmol/L)(p0.05)；且接近正常大鼠組血脂TG(0.64±0.10mmol/L)水平；說(shuō)明給予脂肪酶能有效降低TG水平。組織學(xué)染色進(jìn)一步顯示,口服脂肪酶能降低肝內(nèi)脂肪沉積。給藥30d后,正常大鼠組TC為(1.28±0.45mmol/L),模型組TC為(2.8±1.29mmol/L),易善復(fù)組TC為(2.63±0.64mmol/L),脂肪酶組TC為(2.46±0.46mmol/L)；脂肪酶組TC和易善復(fù)組TC與模型組血脂TC對(duì)比沒(méi)有顯著性差異(p0.05),但均高于正常大鼠組血脂TC(1.28±0.45mmol/L)(p0.05)。 結(jié)論 (1)4種造模方法中,改良高脂乳劑②(10%膽固醇,30%豬油,2%膽酸鈉,10%吐溫80,10%1,2-丙二醇和0.5%丙硫氧嘧啶)所致脂肪肝大鼠模型中同時(shí)存在血脂代謝紊亂及肝臟損傷,模型高效穩(wěn)定,是研究降脂藥物的理想模型。 (2)脂肪酶能顯著改善高脂乳劑誘導(dǎo)的大鼠的高甘油三酯和高脂性脂肪肝。其機(jī)制可能與其能夠提高甘油三酯代謝率、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)等方面有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：高脂性脂肪肝 造模方法 脂肪酶
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.5;R-332
【目錄】：

• 第一部分：口服脂肪酶改善高脂性模型大鼠的血甘油三酯和脂肪肝2-45
• 摘要3-7
• ABSTRACT7-13
• 前言13-14
• 第一章 4種大鼠高脂血癥造模方法的比較14-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-20
• 1.3 技術(shù)路線20
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-24
• 1.5 討論24-27
• 第二章 口服脂肪酶能改善高脂性模型大鼠的血甘油三酯和脂肪肝27-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料27-30
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法30-32
• 2.3 技術(shù)路線32-33
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-37
• 2.5 討論37-39
• 總結(jié)39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 中英文縮略詞表44-45
• 第二部分：玉米須和花青素聯(lián)合抑制引起泌尿系感染的常見(jiàn)菌群生長(zhǎng)45-72
• 摘要46-49
• ABSTRACT49-52
• 第一章 細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的測(cè)定和藥物濃度的選擇52-56
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料52-53
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法53-54
• 1.3 技術(shù)路線54
• 1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-55
• 1.5 討論55-56
• 第二章 單獨(dú)使用玉米須提取物和花青素對(duì)大腸桿菌、金色葡萄球菌和克雷伯菌的抑菌作用56-62
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料56-57
• 2.2 主要試劑的配制57
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法57-58
• 2.4 技術(shù)路線58-59
• 2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-61
• 2.6 討論61-62
• 第三章 玉米須提取物—花青素聯(lián)合使用對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和克雷伯菌的抑制作用62-68
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料62-64
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法64
• 3.3 數(shù)據(jù)處理64
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果64-66
• 3.5 討論66-68
• 參考文獻(xiàn)68-72
• 攻讀碩士期間成果72-73
• 致謝73-74

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：口服脂肪酶改善高脂性模型大鼠的血甘油三酯和脂肪肝，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：357048