本文關(guān)鍵詞：黃芩苷對急性肝損傷大鼠卵圓細(xì)胞的作用及其對細(xì)胞程序性死亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：黃芩苷(baicalin)為黃酮類化合物,是傳統(tǒng)中藥黃芩的有效成分，已被證實具有抗炎、抑菌、抗氧化、清除自由基等生理作用。近年來的研究表明,黃芩苷對肝臟也有保護(hù)作用。 急性肝損傷是指以肝功能異常為主要表現(xiàn)的臨床疾病，急性起病，多有明確誘因，可出現(xiàn)發(fā)熱、黃疸等臨床癥狀，嚴(yán)重或持續(xù)的肝損傷最終可導(dǎo)致急性肝功能衰竭。急性肝損傷的常見病因主要有病毒感染、藥物因素、過度飲酒及外傷因素等。近年來，隨著人們生活水平及醫(yī)療水平的提高，食品添加劑超標(biāo)、過量飲酒、自行濫用藥物及臨床用藥種類增加，急性肝損傷的發(fā)病率也逐年增高。 卵圓細(xì)胞(hepatic oval cell，HOC)作為一類具有多向分化潛能的肝臟干細(xì)胞，在肝臟疾病的治療方面具有重要的意義，近年來受到國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注。 在正常的機體組織中，有細(xì)胞的增殖生長，就必然存在細(xì)胞的衰老和死亡。細(xì)胞死亡形式包括凋亡、自噬性細(xì)胞死亡和壞死三類，其中前兩類又被稱為程序性細(xì)胞死亡(programmed cell death, PCD)。其中自噬(autophagy)是近年來國內(nèi)外學(xué)者研究的熱點，其在哺乳動物體內(nèi)作用及與各系統(tǒng)疾病關(guān)系等方面的研究已取得重大進(jìn)展。自噬是真核生物特有的生命現(xiàn)象，利用溶酶體分解自身受損的物質(zhì)，清除損傷細(xì)胞器及廢棄蛋白質(zhì)等，在神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、消化系統(tǒng)等疾病的發(fā)生、發(fā)展及治療方面均發(fā)揮重要作用。 目的：通過建立HOC增殖的急性肝損傷大鼠模型，研究黃芩苷對急性肝損傷大鼠卵圓細(xì)胞增殖、分化的影響及肝組織凋亡、自噬的影響，從而探討黃芩苷對急性肝損傷的作用及可能的機制。 方法：將96只健康SD大鼠（體重200g±20g）隨機分為正常對照組、模型組、黃芩苷低劑量組及黃芩苷高劑量組，分別標(biāo)記為K、M、BL及BH。各組隨機分為4個亞組。模型組大鼠給予2-乙酰胺基芴（2-acetaminofluorene，2-AAF）溶液灌胃，以15mg/kg.d連續(xù)灌胃4天，次日模型組大鼠行2/3部分肝切除手術(shù)。黃芩苷低劑量組及高劑量組大鼠在灌胃2-AAF溶液的同時灌胃黃芩苷溶液（低劑量組50mg/kg.d、高劑量組100mg/kg.d），灌胃4日后行2/3部分肝切除手術(shù)，次日繼續(xù)灌胃黃芩苷溶液至處死。各組大鼠于術(shù)后第1天、7天、14天、21天分別處死并取材。 組織處理后應(yīng)用蘇木素-伊紅（haematoxylin-eosin，H-E）染色，顯微鏡下觀察肝組織顯微結(jié)構(gòu)；應(yīng)用免疫組織化學(xué)法(immunohistochemistry，IHC)檢測肝組織c-kit、甲胎蛋白（a-fetoprotein，AFP）、細(xì)胞角蛋白19（Cytokeratin-19，CK19）的表達(dá)；應(yīng)用免疫熒光技術(shù)（immunofluorescencetechnic，IFT）檢測肝組織OV6表達(dá)情況；應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)法檢測上皮細(xì)胞粘附分子（Epithelial cell adhesion molecule，EpCAM）和增殖細(xì)胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA）共表達(dá)情況；應(yīng)用原位缺口末端標(biāo)記法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）檢測肝細(xì)胞凋亡情況；應(yīng)用Western blot檢測Beclin1及微管相關(guān)蛋白1輕鏈3β（Microtubule-associated protein1light chain3beta，LC3B）表達(dá)；應(yīng)用比色法檢測血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine transaminase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate transaminase，AST）、堿性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）及白蛋白（Albumin，ALB）的含量。 結(jié)果：①大鼠肝功能結(jié)果顯示：黃芩苷干預(yù)組與模型組相比，AST、ALT及ALP降低（P0.05），而ALB升高（P0.05），且黃芩苷高劑量組較低劑量組AST、ALT及ALP降低更顯著（P0.05）。②H-E染色證實本實驗?zāi)Ｐ痛笫蟾谓M織中存在HOC增殖，提示本實驗成功建立了HOC增殖的急性肝損傷模型。③IHC測定的HOC標(biāo)志物c-kit及IFT檢測的OV6表達(dá)均在大鼠肝切除術(shù)后第7-14天增加明顯，，第14天達(dá)到峰值，各組間的表達(dá)有差別（P0.05）。黃芩苷干預(yù)組HOC標(biāo)記物表達(dá)較模型組偏低（P0.05），且高劑量組較低劑量組降低更明顯（P0.05）。④免疫熒光雙標(biāo)檢測肝組織PCNA陽性率在術(shù)后第1天最高，隨時間延長呈現(xiàn)逐漸下降趨勢，各組間表達(dá)有差異（P0.05）。黃芩苷高劑量組較模型組的PCNA陽性率顯著降低（P0.05），低劑量組和模型組比較無差異（P0.05）。⑤HOC肝細(xì)胞及膽管細(xì)胞表型標(biāo)記物表達(dá)在各組間均有差異（P0.05），與模型組比較，黃芩苷干預(yù)組AFP表達(dá)略偏低（P0.05），CK19表達(dá)偏高（P0.05）。⑥TUNEL法測得各組間細(xì)胞凋亡水平有差異（P0.05），黃芩苷干預(yù)組較模型組細(xì)胞凋亡數(shù)量偏低（P0.05），且高劑量組較低劑量組偏低略明顯（P0.05）。⑦Western blot方法檢測自噬標(biāo)記物L(fēng)C3B及Beclin1表達(dá)在各組間均有差異（P0.05），模型組大鼠兩標(biāo)記物表達(dá)均呈現(xiàn)上升趨勢，黃芩苷干預(yù)組術(shù)后標(biāo)記物的表達(dá)呈先升后降的趨勢，黃芩苷干預(yù)組與模型組比較有差別（P0.05），黃芩苷高劑量組較低劑量組下降趨勢更明顯（P0.05）。 結(jié)論：黃芩苷對急性肝損傷大鼠的肝臟有保護(hù)作用，可抑制肝臟損傷后HOC的過度增殖，并誘導(dǎo)增殖的HOC向成熟的肝細(xì)胞及膽管細(xì)胞分化，抑制急性肝損傷大鼠肝臟細(xì)胞的凋亡及自噬，這可能是黃芩苷對急性肝損傷發(fā)揮保護(hù)作用的機制。
【關(guān)鍵詞】：黃芩苷 急性肝損傷 卵圓細(xì)胞 增殖 凋亡 自噬
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R575;R285.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-10
• 英文縮寫10-11
• 前言11
• 材料與方法11-20
• 結(jié)果20-25
• 附圖25-36
• 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述 黃芩苷在肝臟疾病中的作用及機制研究進(jìn)展42-50
• 參考文獻(xiàn)46-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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  本文關(guān)鍵詞：黃芩苷對急性肝損傷大鼠卵圓細(xì)胞的作用及其對細(xì)胞程序性死亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：351436