目的:探討HBVX基因及其產(chǎn)物對(duì)肝細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.方法:將實(shí)驗(yàn)用SPF級(jí)成年雄性KM小鼠分為實(shí)驗(yàn)組、空質(zhì)粒對(duì)照組、生理鹽水對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組以構(gòu)建好的PCDNA3.1-HBVX質(zhì)粒,空質(zhì)粒對(duì)照組以PCDNA3.1質(zhì)粒,生理鹽水對(duì)照組以生理鹽水,通過尾靜脈高壓注入動(dòng)物體內(nèi),在第48h處死取動(dòng)物肝組織,以RT-PCR,凝膠回收測(cè)序及Westernblot檢測(cè)HBVX表達(dá),以RT-PCR半定量檢測(cè)動(dòng)物肝組織內(nèi)Bax,bcl-2及c-myc的表達(dá)情況。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組小鼠RT-PCR顯示465bp處有清楚條帶,肝組織內(nèi)有HBVX mRNA的存在,對(duì)照組無HBVX mRNA存在,Westernblot檢測(cè)有HBVX蛋白的表達(dá);對(duì)照組小鼠則無HBVX蛋白表達(dá)。通過對(duì)小鼠肝組織凋亡相關(guān)因子的半定量RT-PCR,相對(duì)于空質(zhì)粒對(duì)照組和生理鹽水對(duì)照組,轉(zhuǎn)染HBVX基因的小鼠肝組織Bax（1.3127±0.0900vs1.0023±0.1670 P<0.05, 1.3127±0.0900vs0.9094±0.1081 P<0.05）、c-myc（1.6294±0.0672vs1.2869±0... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：45 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

基因RTPCR結(jié)果

圖 2 X 基因膠回收測(cè)序結(jié)果(從第 222 堿基到第 686 堿基為 X 基因序列在 NCBI 網(wǎng)上進(jìn)行同源序列分析，結(jié)果如下：>gb|GQ924634.1| Hepatitis B virus isolate M57, complete genomeLength=3215Score = 843 bits (456), Expect = 0.0Identities = 462/465 (99%), Gaps = 0/465 (0%)Strand=Plus/PlusQuery 1 ATGGCTGCTAGGCTGTGCTGCCAACTGGATCCTGCGCGGGACGTCCTTTGTTTACGTCCC 60||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||Sbjct 1374 ATGGCTGCTAGGCTGTGCTGCCAACTGGATCCTGCGCGGGACGTCCTTTGTTTACGTCCC 1433

1.Bax 基因 mRNA 相對(duì)表達(dá)量的變化：轉(zhuǎn)染表達(dá)量較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對(duì)照組（1.3127±0.照組（1.3127±0.0900vs0.9094±0.1081 P5） 說明 HBVX 能上調(diào) Bax 的表達(dá)。2.c-myc 基因 mRNA 相對(duì)表達(dá)量的變化：轉(zhuǎn)表達(dá)量較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對(duì)照組（1.6294±0.照組（1.6294±0.0672vs0.9757±0.0397 P6） 說明 HBVX 能上調(diào) c-myc 的表達(dá)。3.Bcl-2 基因 mRNA 相對(duì)表達(dá)量的變化：轉(zhuǎn)對(duì)表達(dá)量較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒對(duì)照組（1.5567±0.組（1.5567±0.1257vs0.5488±0.1278 P<0.0說明 HBVX 能上調(diào) Bcl-2 的表達(dá)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]HBx對(duì)肝細(xì)胞凋亡的雙向調(diào)控及機(jī)制[J]. 張生君,王小眾.  世界華人消化雜志. 2004(10)
[2]乙肝病毒X基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及人肝細(xì)胞株HL-7702轉(zhuǎn)染[J]. 陳紅英,唐南洪,張生君,陳治新,王小眾.  世界華人消化雜志. 2004(03)
[3]Expression of nuclear factor-KB in hepatocellular carcinoma and its relation with the X protein of hepatitis B virus[J]. Shuang Ping Guo~1 Wen Liang Wang~1 Yu Qiang Zhai~2 Yi Ling Zhao~1 ~1Department of Pathology,Xijing Hospital of the Fourth Military Medical University,Xi’an,China ~2Department of Urology,the Central Hospital of Xi’an,China.  World Journal of Gastroenterology. 2001(03)
[4]人乙型肝炎病毒x基因轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立[J]. 屠亞軍,琦祖和,楊鵬,潘燕,于樹玉,杜淼,李光三.  中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào). 2000(03)
[5]乙肝病毒X基因與肝癌[J]. 王小眾,陶其敏.  世界華人消化雜志. 1999(12)
[6]HBV X PROTEIN（HBX） INTERACTS WITH GENERAL TRANSCRIPTION FACTOR TFIIB BOTH INVITRO AND IN VIVO[J]. 楊益大,馬亦林,鄭臨,陳亞崗,馬偉杭,村上清史.  Chinese Medical Sciences Journal. 1999(03)



本文編號(hào)：3439166