本文關(guān)鍵詞：腸缺血再灌注條件下腎上腺髓質(zhì)素對腸粘膜屏障功能的作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 腸粘膜表面由大量腸上皮細(xì)胞構(gòu)成，在內(nèi)、外環(huán)境之間形成了一個天然保護(hù)屏障，能抵御腸腔內(nèi)的炎性因子、微生物等有害物質(zhì)進(jìn)入血液循環(huán)，這個屏障就稱之為腸粘膜屏障，是機體防御系統(tǒng)的重要組成部分。腸缺血再灌注損傷(ischemia/reperfusioninjury，I/R)發(fā)生在小腸移植、燒傷、出血、敗血癥等許多臨床相關(guān)的病理過程中，能導(dǎo)致腸粘膜結(jié)構(gòu)破壞和屏障功能受損，使腸道的通透性升高，進(jìn)一步可引起腸源性感染，甚至發(fā)展為多器官功能障礙綜合征，嚴(yán)重危及患者生命。因此，尋找新的有效途徑來預(yù)防和治療腸I/R的病人顯得尤為必要。 腎上腺髓質(zhì)素(Adrenomedullin，AM)是一種血管舒張肽，最早在人的嗜鉻細(xì)胞瘤中分離得到，其功能除了舒張血管還與增殖、凋亡關(guān)系密切。已有研究報道，AM能顯著改善腸炎引起的腸屏障功能紊亂，在腸粘膜穩(wěn)態(tài)的維持中發(fā)揮很重要的調(diào)控作用；而在腸I/R條件下，AM保護(hù)腸粘膜屏障已被認(rèn)為與其下調(diào)腸道炎癥因子密切相關(guān)[1]，但是關(guān)于AM是否通過腸上皮間緊密連接來發(fā)揮作用進(jìn)而影響屏障功能的文獻(xiàn)報道尚少。因此，本課題的目的主要是研究在腸I/R條件下AM對腸粘膜屏障的作用及其可能存在的機制。 方法 1.建立腸上皮細(xì)胞株Caco-2缺氧模型以及加入AM1-52、AM22-52、CGRP8-37干預(yù)模型，用Transwell小室對腸上皮細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和用電阻儀測定其跨上皮電阻(Transepithelial Resistance，TER)，從而確定腸上皮細(xì)胞TER在缺氧及以上幾種干預(yù)情況下的變化。 2.結(jié)合AM的受體阻斷劑AM22-52、CGRP8-37，通過蛋白免疫印跡和激光共聚焦技術(shù)，，檢測AM對腸上皮細(xì)胞中緊密連接蛋白的表達(dá)及結(jié)構(gòu)的影響，從而確定AM1和AM2受體在AM調(diào)控腸上皮屏障功能中具體是哪個受體發(fā)揮主要的作用。 3.建立小鼠腸缺血再灌注(I/R)損傷模型，通過蛋白免疫印跡、Real-time PCR及Ussing chambers技術(shù)，檢測小鼠腸粘膜中AM及其主要受體成分(CRLR、RAMP2、RAMP3)的表達(dá)變化和STAT1信號途徑的激活情況；以及腸道粘膜TER在I/R和AM干預(yù)情況下的變化。 4.在上述的體內(nèi)模型中，通過蘇木素-伊紅(hematoxylin-eosin，HE)染色的方法，檢測腸粘膜形態(tài)結(jié)構(gòu)在I/R和AM干預(yù)情況下的變化。 主要結(jié)果 1.缺氧引起腸上皮細(xì)胞TER值下降，而AM顯著改善了缺氧引起的腸上皮屏障功能損害；與此同時，加入AM22-52能明顯降低AM的保護(hù)作用，然而加入CGRP8-37對AM的作用影響不大。 2.單純?nèi)毖蹩梢鹉c上皮細(xì)胞中緊密連接蛋白Claudin-1表達(dá)下降，并且使其緊密連接的結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞，外源性AM作用于缺氧的Caco-2細(xì)胞，可以使Claudin-1蛋白表達(dá)重新上調(diào)，其緊密連接的結(jié)構(gòu)破壞也減少；與此同時，加入AM22-52和CGRP8-37對AM的影響與上述對TER的作用趨勢基本一致。 3.腸I/R條件下腸粘膜AM蛋白含量顯著升高，術(shù)后6h達(dá)到最高值；伴隨著腸粘膜STAT1絲氨酸殘基磷酸化(p-STAT1(S727))水平也增高；同時引起CRLR、RAMP2mRNA水平顯著升高，而RAMP3mRNA水平無明顯變化。 4.腸I/R條件下腸粘膜中的緊密連接蛋白ZO-1、Claudin-1在蛋白水平和mRNA水平都降低，p-STAT1(S727)被異常激活，并引起腸道TER值下降，使通透性增高；AM干預(yù)處理后顯著改善緊密連接蛋白表達(dá)的降低(除ZO-1mRNA水平無明顯變化)，使激活的p-STAT1(S727)被明顯抑制，并使腸道TER值得到一定程度的升高。 5. HE染色鏡下可見，I/R條件下腸粘膜中部分小腸絨毛上皮脫落，形態(tài)結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞；經(jīng)AM預(yù)處理使得小腸絨毛重新排列整齊，顯著緩解腸I/R所致的形態(tài)結(jié)構(gòu)損害。 結(jié)論 I/R損傷后AM主要通過AM1(CRLR/RAMP2)受體對腸粘膜屏障起保護(hù)作用，通過調(diào)控腸上皮細(xì)胞間緊密連接蛋白的表達(dá)，從而維持腸粘膜屏障功能，其機制可能與抑制p-STAT1(S727)的激活有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：腸粘膜屏障功能 腎上腺髓質(zhì)素 腸缺血再灌注損傷 緊密連接蛋白 跨上皮電阻
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R574
【目錄】：

• 縮略語表4-5
• Abstract5-7
• 摘要7-9
• 第一章 前言9-14
• 1.1 選題緣由9-10
• 1.2 研究背景10-12
• 1.3 研究意義12-13
• 1.4 研究內(nèi)容13
• 1.5 研究方法13-14
• 第二章 缺氧條件下腎上腺髓質(zhì)素及其受體對腸上皮屏障功能的作用14-34
• 2.1 材料與方法15-27
• 2.2 結(jié)果27-32
• 2.3 討論32-34
• 第三章 AM 通過調(diào)控 STAT1 磷酸化在腸粘膜屏障功能中的作用及機制研究34-43
• 3.1 材料與方法34-39
• 3.2 結(jié)果39-41
• 3.3 討論41-43
• 全文結(jié)論43-44
• 參考文獻(xiàn)44-49
• 文獻(xiàn)綜述 腎上腺髓質(zhì)素與炎癥反應(yīng)及缺血再灌注的研究進(jìn)展49-64
• 參考文獻(xiàn)57-64
• 碩士研究生期間撰寫和發(fā)表的文章64-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 周靜,王杉,葉穎江,楊q

本文編號：341788