發(fā)布時間：2021-09-29 16:22

　　目的:探究膽總管內(nèi)注射細菌脂多糖（LPS）在SD大鼠體內(nèi)是否通過誘導Toll樣受體4（TLR4）刺激肝內(nèi)膽管上皮細胞（IBECs）發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）,并觀察對TLR4下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB及snail的影響及其可能的作用機制。方法:1.健康SPF級SD雄性大鼠32只,體重在270±10 g范圍內(nèi),隨機將其分為四組（n=8/組）,即假手術(shù)對照組:SH組、模型組:LPS組、TLR4 sh RNA+LPS組:KD組、陰性病毒對照+LPS組:NC組。2.KD組和NC組尾靜脈分別注射腺病毒載體TLR4sh RNA和陰性對照病毒（1x109 PFU/只）;96 h后,LPS組、KD組和NC組分別經(jīng)膽總管逆行注射1 mg/kg LPS,SH組經(jīng)膽總管逆行注射生理鹽水作為對照,于48 h后分離保存肝內(nèi)膽管組織。3.蘇木素伊紅（HE）染色觀察膽管上皮細胞的組織病理學變化;實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)（Real-time PCR）和蛋白免疫印跡試驗（Western bolt）檢測所取標本中上皮標記物E-cadherin、CK7,間質(zhì)標記物N-cadherin、MMP-2和TLR4的m RNA和蛋白表... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學貴州省

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

腺病毒載體TLR4shRNA轉(zhuǎn)染至大鼠體內(nèi)96h后，肝內(nèi)膽管上皮細胞的轉(zhuǎn)染情況(低倍鏡100×).

遵義醫(yī)學院碩士學位論文 唐世芳2 結(jié)果2.1 LPS 誘導肝內(nèi)膽管組織膽管上皮細胞形態(tài)學改變HE 染色觀察大鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞的形態(tài)學改變。如圖 2 所示， SH 組大鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞呈柱狀排列整齊、細胞間粘附緊密、細胞結(jié)構(gòu)清晰完整、周圍并無明顯的炎性細胞浸潤；LPS 組膽管壁增厚，膽管上皮細胞脫落，部分小膽管上皮細胞排列紊亂、疏松、膽管上皮細胞呈梭形改變（紅箭頭所示），管腔內(nèi)有炎性細胞浸潤。TLR4 shRNA+LPS 組中膽管細胞排列基本規(guī)則，膽管壁無明顯增厚，少量膽管上皮細胞脫落，可發(fā)現(xiàn)周圍僅有少量炎性細胞，為圓形或橢圓形，相比 LPS 感染組炎性表現(xiàn)明顯減輕；NC shRNA+LPS 組中同樣有小膽管上皮細胞呈梭形改變，細胞間粘附性減弱（紅箭頭所示）。

究 LPS 是否能誘導大鼠肝內(nèi)膽管上皮細胞發(fā)生 EMT，CR 法檢測肝內(nèi)膽管上皮細胞特異性上皮標記物 E-cadherin 素方差分析，各組 E-cadherin 基因表達差異見表 7。如圖 3 （SH 組）的 E-cadherin 基因表達水平明顯降低； TLR4 shR、NC shRNA+LPS 組相比較， E-cadherin 基因表達明顯升高LPS 組兩組間的 E-cadherin 基因變化無明顯差異；但同 SH 組 組中 E-cadherin 表達量仍有降低（P<0.01），說明可能存在MT。表 7 各組中 E-cadherin mRNA 表達量的比較（ x ±SEM）Table 7 E-cadherin mRNA expression in four groups（ x ±SEM）SH LPS TLR4 shRNA+LPS NC0.9146±0.04146 0.499±0.02729##0.7708±0.02946#0.50roup;#P<0.01vs LPS group;△P<0.01vs TLR4 shRNA+LPS group.

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Toll樣受體4信號通路對腦缺血損傷影響的研究進展[J]. 楊雪華,王銳,陳立杰.  中國臨床神經(jīng)科學. 2016(04)
[2]上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化與肝膽管結(jié)石病的研究進展[J]. 趙禮金,王芳.  世界華人消化雜志. 2016(08)
[3]肝膽管結(jié)石成因及分型[J]. 呂立升,魏妙艷,湯朝暉.  中國實用外科雜志. 2016(03)
[4]Hepatolithiasis and intrahepatic cholangiocarcinoma: A review[J]. Hyo Jung Kim,Jae Seon Kim,Moon Kyung Joo,Beom Jae Lee,Ji Hoon Kim,Jong Eun Yeon,Jong-Jae Park,Kwan Soo Byun,Young-Tae Bak.  World Journal of Gastroenterology. 2015(48)
[5]Toll樣受體4信號通路研究進展[J]. 蔡炳岡,朱進,汪茂榮.  醫(yī)學研究生學報. 2015(11)
[6]Toll樣受體靶向藥物的研究進展[J]. 鐘靜靜,萬巖巖,刁昱文,劉兵,王竹林,靳廣毅,高寧寧.  生命科學. 2015(04)
[7]胃癌術(shù)后膽石癥發(fā)病相關(guān)因素的Meta分析[J]. 周徽,彭健.  中華肝膽外科雜志. 2015 (02)
[8]TLR4及其作用的研究進展[J]. 易世杰,趙禮金.  蛇志. 2013(02)
[9]LPS刺激SD大鼠膽管上皮細胞表型轉(zhuǎn)化的動物實驗研究[J]. 王麥建,楊雪峰,周廷梅,余得剛,江燕,王曙光,趙禮金.  重慶醫(yī)科大學學報. 2010(11)
[10]重癥急性胰腺炎病人的腸黏膜屏障功能障礙[J]. 丁凱,李維勤.  腸外與腸內(nèi)營養(yǎng). 2008(06)

碩士論文
[1]LPS通過激活TLR4誘導人肝內(nèi)膽管上皮細胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化[D]. 王芳.遵義醫(yī)學院 2016
[2]TLR4-snail信號通路在LPS誘導的人膽管上皮細胞EMT中作用初步研究[D]. 顧進.遵義醫(yī)學院 2015
[3]LPS誘導膽管上皮細胞Toll樣受體4及上皮—間葉樣表型轉(zhuǎn)化相關(guān)標志物表達變化的實驗研究[D]. 梁塏.遵義醫(yī)學院 2013



本文編號：3414039