目的:探究膽總管內(nèi)注射細(xì)菌脂多糖（LPS）在SD大鼠體內(nèi)是否通過誘導(dǎo)Toll樣受體4（TLR4）刺激肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞（IBECs）發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）,并觀察對(duì)TLR4下游核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB及snail的影響及其可能的作用機(jī)制。方法:1.健康SPF級(jí)SD雄性大鼠32只,體重在270±10 g范圍內(nèi),隨機(jī)將其分為四組（n=8/組）,即假手術(shù)對(duì)照組:SH組、模型組:LPS組、TLR4 sh RNA+LPS組:KD組、陰性病毒對(duì)照+LPS組:NC組。2.KD組和NC組尾靜脈分別注射腺病毒載體TLR4sh RNA和陰性對(duì)照病毒（1x109 PFU/只）;96 h后,LPS組、KD組和NC組分別經(jīng)膽總管逆行注射1 mg/kg LPS,SH組經(jīng)膽總管逆行注射生理鹽水作為對(duì)照,于48 h后分離保存肝內(nèi)膽管組織。3.蘇木素伊紅（HE）染色觀察膽管上皮細(xì)胞的組織病理學(xué)變化;實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）和蛋白免疫印跡試驗(yàn)（Western bolt）檢測(cè)所取標(biāo)本中上皮標(biāo)記物E-cadherin、CK7,間質(zhì)標(biāo)記物N-cadherin、MMP-2和TLR4的m RNA和蛋白表... 

【文章來源】：遵義醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

腺病毒載體TLR4shRNA轉(zhuǎn)染至大鼠體內(nèi)96h后，肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況(低倍鏡100×).

遵義醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文 唐世芳2 結(jié)果2.1 LPS 誘導(dǎo)肝內(nèi)膽管組織膽管上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變HE 染色觀察大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變。如圖 2 所示， SH 組大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞呈柱狀排列整齊、細(xì)胞間粘附緊密、細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰完整、周圍并無(wú)明顯的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；LPS 組膽管壁增厚，膽管上皮細(xì)胞脫落，部分小膽管上皮細(xì)胞排列紊亂、疏松、膽管上皮細(xì)胞呈梭形改變（紅箭頭所示），管腔內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。TLR4 shRNA+LPS 組中膽管細(xì)胞排列基本規(guī)則，膽管壁無(wú)明顯增厚，少量膽管上皮細(xì)胞脫落，可發(fā)現(xiàn)周圍僅有少量炎性細(xì)胞，為圓形或橢圓形，相比 LPS 感染組炎性表現(xiàn)明顯減輕；NC shRNA+LPS 組中同樣有小膽管上皮細(xì)胞呈梭形改變，細(xì)胞間粘附性減弱（紅箭頭所示）。

究 LPS 是否能誘導(dǎo)大鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞發(fā)生 EMT，CR 法檢測(cè)肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞特異性上皮標(biāo)記物 E-cadherin 素方差分析，各組 E-cadherin 基因表達(dá)差異見表 7。如圖 3 （SH 組）的 E-cadherin 基因表達(dá)水平明顯降低； TLR4 shR、NC shRNA+LPS 組相比較， E-cadherin 基因表達(dá)明顯升高LPS 組兩組間的 E-cadherin 基因變化無(wú)明顯差異；但同 SH 組 組中 E-cadherin 表達(dá)量仍有降低（P<0.01），說明可能存在MT。表 7 各組中 E-cadherin mRNA 表達(dá)量的比較（ x ±SEM）Table 7 E-cadherin mRNA expression in four groups（ x ±SEM）SH LPS TLR4 shRNA+LPS NC0.9146±0.04146 0.499±0.02729##0.7708±0.02946#0.50roup;#P<0.01vs LPS group;△P<0.01vs TLR4 shRNA+LPS group.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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[3]LPS誘導(dǎo)膽管上皮細(xì)胞Toll樣受體4及上皮—間葉樣表型轉(zhuǎn)化相關(guān)標(biāo)志物表達(dá)變化的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 梁塏.遵義醫(yī)學(xué)院 2013



本文編號(hào)：3414039