目的：觀察HMGB1-Abox高表達對腸上皮細胞株SW480和單核細胞株THP-1中LPS/TLR4的影響，為以HMGB1-Abox為靶點治療IBD提供理論和實驗依據(jù)。方法：㈠LPS對SW480細胞HMGB1表達的影響實驗分組如下：①對照組：SW480+0ng/ml LPS；②實驗組1：SW480+100ng/ml LPS；③實驗組2：SW480+1000ng/ml LPS；④實驗組3：SW480+10000ng/ml LPS；培養(yǎng)SW480細胞至對數(shù)生長期，給予不同濃度LPS分別作用12h、24h收集細胞檢測HMGB1的表達（重復(fù)3次）。㈡構(gòu)建和鑒定HMGB1-Abox高表達細胞株⑴HMGB1-Abox重組真核質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定①在GeneBank中查找人HMGB1-A box基因序列，由公司基因合成。②將合成的HMGB1-A box基因插入到pEGFP-N1載體，構(gòu)建重組質(zhì)粒。擴增及提取重組質(zhì)粒，鑒定方法采用酶切和測序。⑵HMGB1-Abox重組真核質(zhì)粒在SW480細胞內(nèi)的表達采用陽脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將pEGFP-N1-HMGB1-A box轉(zhuǎn)染SW480細胞，分別觀察有無綠色熒光及熒光... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料與方法
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 質(zhì)粒
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
        2.1.5 主要溶液配制
    2.2 方法
        2.2.1 篩選 HMGB1-A box 低表達腸上皮細胞株
        2.2.2 構(gòu)建和鑒定 HMGB1-A box 高表達腸上皮細胞株
        2.2.3 HMGB1-A box 高表達及 EP 對 SW480 細胞 HMGB1、TLR4、MyD88 及 pNF-κB p65 及促炎因子分泌的影響
        2.2.4 EP 及 HMGB1-A box 高表達 SW480 細胞與 THP-1 細胞共培養(yǎng)對THP-1 細胞 HMGB1、LPS/TLR4 信號通路及促炎因子分泌的影響
    2.3 統(tǒng)計學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 篩選 HMGB1-A box 低表達腸上皮細胞株
    3.2 LPS 對 SW480 細胞內(nèi) HMGB1 mRNA 表達的影響
    3.3 構(gòu)建 HMGB1-A box 高表達 SW480 細胞
        3.3.1 重組 pEGFP-N1-HMGB1-A box 質(zhì)粒的鑒定
        3.3.2 重組 HMGB1-Abox 真核質(zhì)粒在 SW480 細胞內(nèi)的表達
    3.4 EP 和 HMGB1-A box 高表達對 SW480 細胞 HMGB1 、TLR4/LPS 信號通路及促炎因子分泌的影響
        3.4.1 EP 和 HMGB1-A box 高表達對 SW480 細胞內(nèi) HMGB1 mRNA 及蛋白表達的影響
        3.4.2 EP 和 HMGB1-Abox 高表達對 SW480 細胞內(nèi) TLR4 mRNA 及蛋白表達的影響
        3.4.3 EP 和 HMGB1-A box 高表達對 SW480 細胞內(nèi) MyD88 mRNA 及蛋白表達的影響
        3.4.4 EP和HMGB1-Abox高表達對SW480細胞內(nèi)pNF-κB p65蛋白表達的影響
        3.4.5 EP 和 HMGB1-Abox 高表達對 SW480 細胞分泌 HMGB1、IL-1β、TNF-α和 IL-6 的影響
    3.5 EP 及 A-box 高表達 SW480 細胞與 THP-1 細胞共培養(yǎng)對 THP-1 細胞內(nèi)HMGB1、TLR4/LPS 信號通路及促炎因子分泌的影響
        3.5.1 EP 及 A-box 高表達 SW480 細胞與 THP-1 細胞共培養(yǎng)對 THP-1 細胞內(nèi) HMGB1 mRNA 及蛋白表達的影響
        3.5.2 EP 及 A-box 高表達 SW480 細胞與 THP-1 細胞共培養(yǎng)對 THP-1 細胞內(nèi) TLR4 mRNA 及蛋白表達的影響
        3.5.3 EP 及 A-box 高表達 SW480 細胞與 THP-1 細胞共培養(yǎng)對 THP-1 細胞內(nèi) MyD88 mRNA 及蛋白表達的影響
        3.5.4 EP 及 A-box 高表達 SW480 細胞與 THP-1 細胞共培養(yǎng)對 THP-1 細胞 pNF-κB p65 蛋白表達的影響
        3.5.5 EP 及 A-box 高表達 SW480 細胞與 THP-1 細胞共培養(yǎng)對 THP-1 細胞分泌 HMGB1、IL-1β、TNF-α和 IL-6 的影響
第4章 討論
    4.1 LPS 對 SW480 細胞及 THP-1 細胞內(nèi) TLR4 信號通路的影響
    4.2 LPS 對 SW480 細胞及 THP-1 細胞 HMGB1 表達和分泌的影響
    4.3 HMGB1-A box 高表達對 SW480 細胞及 THP-1 細胞內(nèi) LPS/TLR4 信號通路和促炎因子的影響
    4.4 EP 對 SW480 細胞及 THP-1 細胞內(nèi) LPS/TLR4 信號通路和促炎因子的影響
第5章 結(jié)論
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻



本文編號：3361093