本文關(guān)鍵詞：ChREBP及其靶基因PNPLA3在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是肝細(xì)胞中積聚大量甘油三酯而造成的臨床病理綜合征，NAFLD包含非酒精性單純性脂肪肝（nonalcoholic simple fatty liver,NAFL）、脂肪性肝炎(nonalcoholicsteatohepatitis,NASH)和NASH相關(guān)肝纖維化，肝硬變和肝癌。隨著人們生活和飲食的習(xí)慣的變化，越來越多的人患有非酒精性脂肪肝疾病，可能最終是發(fā)展為肝硬化的結(jié)果。非酒精性脂肪性肝病現(xiàn)已成為了常見的肝病之一，嚴(yán)重危害著人們的生命健康。所以要闡明非酒精性脂肪性肝病得發(fā)病機(jī)制，在理論和臨床路徑的選擇上對(duì)其診療有非常重要的價(jià)值。但是NAFLD的詳細(xì)發(fā)病機(jī)理目前還沒徹底闡明，往往與胰島素抵抗綜合征(insulin-risistantsymdrome,IRS)或代謝綜合征((metabolic syndrome,MS)相關(guān)，如肥胖、高脂血癥、糖尿病等，可能是多種因素如遺傳環(huán)境、代謝應(yīng)激等所導(dǎo)致。在最近幾年中，已經(jīng)有研究證實(shí)NAFLD發(fā)病機(jī)制的中心環(huán)節(jié)是異常的脂肪代謝和胰島素抵抗（insulin resistance,IR）。ChREBP及其靶基因PNPLA3是胰島素抵抗的發(fā)生發(fā)展中的關(guān)鍵因素，近年很多研究發(fā)現(xiàn)ChREBP以及其靶基因PNPLA3可以增加NAFLD的發(fā)病易感性，與胰島素抵抗、肝炎、肝纖維化的發(fā)生發(fā)展密切聯(lián)系，參與NAFLD的發(fā)病機(jī)制，對(duì)于研究ChREBP與PNPLA3的相互關(guān)系以及它們是否通過胰島素抵抗參與NAFLD的發(fā)病，目前的相關(guān)研究報(bào)道較少。本實(shí)驗(yàn)主要是運(yùn)用高脂飼料建立非酒精性脂肪性肝病的大鼠模型，觀測(cè)ChREBP及其靶基因PNPLA3在大鼠肝組織中的表達(dá)情況并探討它們?cè)贜AFLD發(fā)病機(jī)理中的作用，這對(duì)于完善非酒精性脂肪性肝病的發(fā)病機(jī)制具有重要的理論價(jià)值，對(duì)于非酒精性脂肪性肝病的治療也具有重要的臨床價(jià)值。方法：實(shí)驗(yàn)中，用48只180g至220g重的成年雄性SD大鼠，給予一周時(shí)間的適應(yīng)飼養(yǎng)，然后隨機(jī)分成2組：對(duì)照組24只(普通飼料飼養(yǎng))和非酒精性脂肪性肝病模型組24只（高脂飲食飼養(yǎng)），各只大鼠均自由飲水和進(jìn)食飼料，室溫(20±2)℃，自然光線明暗交替各12小時(shí)，并觀察大鼠體重、體長(zhǎng)和大鼠食欲、皮膚、毛發(fā)狀況。隨機(jī)分組后在第4周末，第8周末和第12周末分階段處死兩組大鼠中各8只，對(duì)大鼠的下腔靜脈取血，并測(cè)天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase,AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase,ALT）、總膽固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglycerides,TG）、空腹血糖（fasting blood glucose,FBG）及空腹血胰島素（fasting serum insulin,FINS）水平；然后在根據(jù)FBG、FINS的結(jié)果計(jì)算胰島素的敏感指數(shù)（insulinsensitivity index,ISI，ISI=ln[1／(FBG×FINS)]）。用HE染色進(jìn)行大鼠肝臟組織染色，光鏡下觀測(cè)肝臟組織病理變化，評(píng)估肝臟脂肪變性、炎癥活動(dòng)度和纖維化程度；并在大鼠肝臟組織切片行免疫染色后，測(cè)ChREBP、ACC的蛋白表達(dá)水平；用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)肝臟ChREBP基因、PNPLA3基因的mRNA水平的表達(dá)。結(jié)果：1、成功的建立了大鼠NAFLD模型，對(duì)照組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰完整，肝索呈放射狀分布于中央靜脈周圍；各項(xiàng)生化指標(biāo)均在正常范圍；肝組織內(nèi)可見少量ChREBP、ACC蛋白的表達(dá)；2、與對(duì)照組相比，模型組大鼠的體重增加，肝臟顯著增大，肝細(xì)胞內(nèi)可見脂滴，并隨著建模的時(shí)間的增加肝細(xì)胞脂肪變性的程度加重，還出現(xiàn)了不同程度的炎細(xì)胞浸潤(rùn)和壞死，血生化AST、ALT、TC和TG水平與對(duì)照組同期相比均明顯升高(P0.05)，并隨著飼喂大鼠的時(shí)間的增加而升高(P0.05)，與同一時(shí)期對(duì)照組相比，，血FBG、FINS水平也顯著上升(P0.05)，并隨著飼喂大鼠的時(shí)間的增加而升高(P0.05)，ISI明顯下降(P0.05)；3、與對(duì)照組相比，三期模型組大鼠的ChREBP、ACC蛋白和ChREBP、PNPLA3mRNA在肝組織中的表達(dá)增加，差異有顯著意義(P0.05)，且隨建模時(shí)間延長(zhǎng)，其表達(dá)水平也顯著增加(P0.05)。4、相關(guān)分析表明，模型組中，ChREBP基因的相對(duì)表達(dá)量與ACC和PNPLA3、血清AST、ALT水平、肝臟炎癥活動(dòng)度計(jì)分呈正相關(guān)(與ACC：r=0.409，P0.05，與PNPLA3：r=0.498，P0.05，與血清AST、ALT水平：r=0.677，P0.01，r=0.729，P0.01，與肝臟炎癥活動(dòng)度計(jì)分：r=0.566，P0.01），與IsI呈負(fù)相關(guān)(r=-0.611，P0.01)；PNPLA3mRNA的相對(duì)表達(dá)量與血清AST、ALT水平、肝臟炎癥活動(dòng)度計(jì)分呈正相關(guān)(與血清AST、ALT水平：r=0.663，P0.01，r=0.736，P0.01，與肝臟炎癥活動(dòng)度計(jì)分：r=0.478，P0.05），與IsI呈負(fù)相關(guān)(r=-0.694，P0.01)。結(jié)論：1．高脂肪的飲食可以成功建立大鼠NAFLD模型，出現(xiàn)轉(zhuǎn)氨酶的升高、肥胖、高脂血癥、胰島素抵抗等多個(gè)特征。異常的脂代謝、胰島素的抵抗（IR）和NAFLD有關(guān)。2．正常大鼠肝臟ChREBP、ACC蛋白表達(dá)量較低，NAFLD模型組大鼠肝臟ChREBP、ACC蛋白和ChREBP、PNPLA3mRNA表達(dá)增多，并隨造模時(shí)間的延長(zhǎng)，其表達(dá)顯著增加，肝ChREBP的表達(dá)增加可能激活了如ACC、PNPLA3等一系列與脂質(zhì)合成相關(guān)基因的表達(dá),促進(jìn)脂肪肝的形成。3．ChREBP及其靶基因PNPLA3與反映肝炎癥程度、肝功能和胰島素敏感指數(shù)等指標(biāo)密切相關(guān)，可能是通過參與胰島素抵抗的調(diào)控在NAFLD的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：非酒精性脂肪性肝病 ChREBP基因 PNPLA3基因 胰島素抵抗
【學(xué)位授予單位】：瀘州醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R575.5
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 材料與方法13-21
• 1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器13
• 2 主要實(shí)驗(yàn)試劑13-14
• 3 主要實(shí)驗(yàn)儀器14
• 4 實(shí)驗(yàn)方法14-20
• 5 統(tǒng)計(jì)方法20-21
• 結(jié)果21-29
• 1 一般情況21
• 2 血清生化指標(biāo)的檢測(cè)21-22
• 3 大鼠肝組織病理改變22-25
• 4 大鼠 ChREBP、ACC 免疫組化結(jié)果25-27
• 5 RT-PCR 技術(shù)測(cè)定大鼠肝臟中 PNPLA3 mRNA 的表達(dá)27-29
• 6 模型組 ChREBP 水平與各指標(biāo)相關(guān)性分析29
• 討論29-35
• 1. 非酒精性脂肪性肝�。∟AFLD）29-30
• 2. 胰島素抵抗以及其與 NAFLD 的關(guān)系30
• 3. NAFLD 動(dòng)物模型的選擇30-31
• 4. ChREBP 及其靶基因 PNPLA3、ACC 與 NAFLD31-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-50
• 英文縮略詞對(duì)照50-51
• 致謝51-52
• 綜述52-68
• 參考文獻(xiàn)57-68

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 盧建雄;楊公社;陳粉粉;;TNF-α影響胰島素對(duì)原代培養(yǎng)大鼠脂肪細(xì)胞增殖及生脂基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)[J];動(dòng)物學(xué)報(bào);2006年01期

2 李小山;何松;;ChREBP及其靶基因在高脂大鼠非酒精性脂肪肝中的表達(dá)[J];重慶醫(yī)學(xué);2011年21期

3 盧建雄;陳粉粉;楊公社;;調(diào)控糖酵解和生脂的重要轉(zhuǎn)錄因子:碳水化合物反應(yīng)元件結(jié)合蛋白[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2006年03期

4 程維肖;趙和平;;動(dòng)態(tài)觀察非酒精性脂肪肝大鼠肝臟ChREBP的表達(dá)[J];山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年04期

  本文關(guān)鍵詞：ChREBP及其靶基因PNPLA3在非酒精性脂肪性肝病發(fā)病中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：328631