目的1.克隆樹鼩γ干擾素分子。2.建立樹鼩γ干擾素原核表達(dá)系統(tǒng)。方法1．以樹鼩PBMC cDNA為模板，用兩對引物分別采用PCR法，擴(kuò)增樹鼩IFN-γCDS區(qū)序列2．構(gòu)建樹鼩IFN-γ-pRSETB原核表達(dá)載體，并將載體轉(zhuǎn)入BL21（DE3） PlysS菌中，用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)重組IFN-γ蛋白。結(jié)果1、以樹鼩外周血單核細(xì)胞為模板，設(shè)計兩對引物IFN-P1/IFNP3、IFN-P2/IFNP10，分別采用PCR擴(kuò)增出IFN-γ片段為約344bp和476bp.將兩段PCR產(chǎn)物測序結(jié)果綜合，得到509bp核苷酸序列。將此序列與人類IFN-γ序列比對，證實樹鼩與人類IFN-γ分子間具備較高同源性。2、將429bp IFN-γ編碼區(qū)片段（不含信號肽序列）連接表達(dá)載體pRSET-B，測序結(jié)果證明載體構(gòu)建成功。3、重組質(zhì)粒IFN-γ-pRSETB在BL21（DE3） PlysS菌中經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，以包涵體形式表達(dá)。經(jīng)westernblot分析，證實為約18KD的重組蛋白。結(jié)論1、成功克隆獲得樹鼩γ干擾素CDS區(qū)核苷酸序列。2、成功構(gòu)建樹鼩IFN-γ原核表達(dá)質(zhì)粒IFN-γ-pRSETB，并且在BL2... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢詞匯對照表
摘要
Abstract
引言
材料與方法
結(jié)果
討論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]丙型肝炎病毒細(xì)胞和動物模型的研究進(jìn)展[J]. 張立營,高博,馮玉奎.  生物技術(shù)通訊. 2011(02)
[2]干擾素的抗病毒作用及其臨床應(yīng)用[J]. 楊莉萍,曹素艷,邵宏.  國外醫(yī)學(xué)(藥學(xué)分冊). 2004(02)



本文編號：3259221