本文關(guān)鍵詞：ssrAAV8-Kal對(duì)肝纖維化治療作用的初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：肝纖維化為各種慢性肝病進(jìn)一步發(fā)展并惡化的重要環(huán)節(jié),若能在肝纖維化階段消除致病因素并給與適當(dāng)治療,對(duì)于我國這一肝病大國意義十分重大。肝臟在纖維化過程中,普遍存在缺氧、炎癥、氧化應(yīng)激、門脈高壓和血管增生等癥狀,因此有效的抗纖維化藥物應(yīng)該針對(duì)多靶點(diǎn)、多途徑。目前此類藥物大多數(shù)為重組蛋白,需反復(fù)給藥,用藥麻煩。臨床醫(yī)學(xué)研究表明持續(xù)穩(wěn)定劑量給藥比間斷性峰值給藥更為有效、副作用更低,而新興的基因治療技術(shù)恰能實(shí)現(xiàn)持續(xù)穩(wěn)定的給藥途徑。本課題的研究目的是以本課題組已有一定研究基礎(chǔ)的ssr AAV2-Kal作為對(duì)照,探究ssr AAV8-Kal這一基因藥物對(duì)小鼠肝纖維化的療效,分析2型與8型r AAV載體攜帶Kallistatin對(duì)肝纖維化的療效的差別及對(duì)肝臟的靶向性和體內(nèi)的穩(wěn)定性。本論文研究對(duì)象為CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝纖維化模型,通過對(duì)小鼠的生長(zhǎng)狀態(tài)、肝臟外觀、病理切片、肝功能指標(biāo)、血清纖維化相關(guān)指標(biāo)及肝組織中各項(xiàng)指標(biāo)的檢測(cè)與分析,著重探究了ssr AAV2-Kal和ssr AAV8-Kal兩種基因藥物在相同給藥劑量和相同給藥途徑的情況下,對(duì)小鼠肝纖維化的療效差別;并通過對(duì)各組小鼠在給藥后血清中kallistatin表達(dá)經(jīng)時(shí)關(guān)系及kallistatin組織分布情況的研究,初步探討了ssr AAV8-Kal在肝纖維化治療效果上優(yōu)于ssr AAV2-Kal的原因。研究表明:在相同的給藥劑量和給藥方式的條件下,ssr AAV8-Kal對(duì)小鼠肝纖維化的療效比ssr AAV2-Kal更明顯(基于病理切片、血清指標(biāo)、肝組織指標(biāo)等檢測(cè)與數(shù)據(jù)綜合分析),多項(xiàng)指標(biāo)趨于恢復(fù)正常水平;而ssr AAV8-Kal療效更好的主要原因是ssr AAV8-Kal在體內(nèi)的抗原清除率較ssr AAV2-Kal低,從而得以高效表達(dá)。研究結(jié)果表明ssr AAV8-Kal治療組肝臟中kallistatin含量(8.0×104pg/m L)比ssr AAV2-Kal治療組(7.9×105 pg/m L)高出約10倍,這是其對(duì)肝纖維化的療效更佳的關(guān)鍵因素。本論文通過ssr AAV2-Kal和ssr AAV8-Kal對(duì)比研究,不但證實(shí)了ssr AAV8-Kallistatin在肝纖維化治療中的有效性、便捷性及高效性,更進(jìn)一步完善了臨床前研究材料,為將ssr AAV8-Kallistatin推向臨床提供了重要依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：肝纖維化 基因治療 ssr AAV8-Kallistatin
【學(xué)位授予單位】：華僑大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R575.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第1章 引言8-20
• 1.1 肝纖維化概述8-12
• 1.1.1 肝纖維化的發(fā)病機(jī)制8-9
• 1.1.2 肝纖維化的治療現(xiàn)狀9-12
• 1.2 腺相關(guān)病毒(adeno-associated virus,AAV)概述12-16
• 1.2.1 AAV的基因組結(jié)構(gòu)13
• 1.2.2 AAV的血清型13
• 1.2.3 AAV的臨床研究進(jìn)展13-16
• 1.3 Kallistatin概述16-17
• 1.3.1 Kal的生物學(xué)特性16
• 1.3.2 Kal的功能及在疾病治療中的應(yīng)用16-17
• 1.4 課題來源與意義17-19
• 1.5 課題研究思路、特色與主要研究?jī)?nèi)容19-20
• 第2章 ssr AAV2、8-Kallistatin抗纖維化作用研究20-48
• 2.1 前言20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑配制及主要儀器20-22
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料20-21
• 2.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑配制21-22
• 2.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器22
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法22-32
• 2.3.1 肝纖維化小鼠模型構(gòu)建及給藥22-23
• 2.3.2 小鼠血清樣品的制備及保存23
• 2.3.3 小鼠各組織器官的制備及保存23
• 2.3.4 肝組織勻漿的制備23
• 2.3.5 石蠟標(biāo)本的制備23-24
• 2.3.6 載玻片清洗及處理24
• 2.3.7 石蠟切片的制備24-25
• 2.3.8 肝組織蘇木素伊紅（HE）染色25
• 2.3.9 肝組織天狼猩紅染色25-26
• 2.3.10肝組織Masson三色染色26-27
• 2.3.11谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）測(cè)定27
• 2.3.12谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）測(cè)定27-28
• 2.3.13總膽紅素（TBIL）測(cè)定28
• 2.3.14小鼠透明質(zhì)酸（HA）測(cè)定28-29
• 2.3.15小鼠層粘連蛋白（LN）測(cè)定29
• 2.3.16小鼠Ⅲ型膠原（C-Ⅲ）測(cè)定29
• 2.3.17小鼠Ⅳ型膠原（C-Ⅳ）測(cè)定29
• 2.3.18小鼠肝組織超氧化物歧化酶（SOD）測(cè)定29-30
• 2.3.19肝組織丙二醛（MDA）測(cè)定30-31
• 2.3.20小鼠肝組織羥脯氨酸（Hyp）測(cè)定（堿水解法）31-32
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析32-46
• 2.4.1 肝纖維化小鼠模型的構(gòu)建及給藥32
• 2.4.2 小鼠肝臟外觀32-34
• 2.4.3 肝組織切片HE染色34-35
• 2.4.4 肝組織切片苦味酸天狼猩紅染色35-36
• 2.4.5 肝組織切片Masson三色染色36-37
• 2.4.6 肝功能指標(biāo)（ALT、AST、TBIL）檢測(cè)37-39
• 2.4.7 纖維化血清標(biāo)志物（HA、LN、C-Ⅲ、C-Ⅳ）檢測(cè)39-43
• 2.4.8 肝組織氧化指標(biāo)（MDA、SOD）檢測(cè)43-45
• 2.4.9 肝組織羥脯氨酸含量（Hyp）檢測(cè)45-46
• 2.5 本章小結(jié)與討論46-48
• 第3章 對(duì)ssr AAV2、8-Kallistatin表達(dá)經(jīng)時(shí)關(guān)系及組織分布的研究48-57
• 3.1 前言48
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料、試劑配制及主要儀器48-49
• 3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料48
• 3.2.2 實(shí)驗(yàn)試劑配制48-49
• 3.2.3 實(shí)驗(yàn)儀器49
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法49-50
• 3.3.1 各臟器組織勻漿的制備49
• 3.3.2 各樣本Kallistatin含量的檢測(cè)49-50
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析50-56
• 3.4.1 各組小鼠血清中kallistatin表達(dá)的經(jīng)時(shí)關(guān)系50-51
• 3.4.2 各組小鼠中kallistatin在各組織的分布51-53
• 3.4.3 各組小鼠各個(gè)組織中kallistatin濃度53-56
• 3.5 本章小結(jié)與討論56-57
• 第4章 結(jié)論57-59
• 4.1 研究總結(jié)57
• 4.2 問題及展望57-58
• 4.3 需進(jìn)一步開展的研究58-59
• 參考文獻(xiàn)59-66
• 致謝66-67
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果67

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 趙長(zhǎng)青;吳藝青;徐列明;;扶正化瘀膠囊抗肝纖維化的臨床療效和作用機(jī)制[J];中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào);2006年05期

2 姜慧卿;張曉嵐;;肝纖維化的發(fā)生機(jī)制[J];世界華人消化雜志;2000年06期

3 楊宏志;陳琰碧;許瑞云;沈偉生;陳國慶;劉煜;;Clinical Observation on the Long-Term Therapeutic Effects of Traditional Chinese Medicine for Treatment of Liver Fibrosis[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2000年04期

  本文關(guān)鍵詞：ssrAAV8-Kal對(duì)肝纖維化治療作用的初探，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：319222