siRNA（small interfering RNA）是RNA干擾發(fā)揮效應的必須因子，它是一類長約21-25nt的非編碼小RNA分子，由Dicer酶剪切加工而成。siRNA是RISC （RNA-induced silencing complex）的主要成員，能夠激發(fā)與之互補的目標mRNA沉默，參與轉錄后基因表達的調控。siRNA已被證實能夠在許多生物學過程中起重要作用，然而目前面臨的最主要問題是如何將siRNA片段導入到靶細胞中，讓其安全、高效、穩(wěn)定地表達目的基因。本研究嘗試構建表達siRNA的小環(huán)載體，并初步鑒定其對乙肝病毒（hepatitis B virus， HBV）復制及其基因表達的抑制作用。設計并合成靶向HBV S區(qū)的siRNA，將其克隆到小環(huán)載體pMC.BESPX-MCS2上，測序正確后將重組體pMC-H1-siHBS-U6轉化入感受態(tài)E.coliZYCY10P3S2T，然后在培養(yǎng)基中加入L-阿拉伯糖，誘導其降解細菌骨架，獲取只含有目的基因表達盒的小環(huán)RNA干擾載體pmc-H1-siHBS-U6。將小環(huán)RNA干擾載體與HBV的真核表達質粒pHBV1.3共轉染人肝癌細胞Hu... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對照
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 小環(huán) RNA 干擾載體 pmc-H1-siHBS-U6 的構建及鑒定
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結果
第二部分 pmc-H1-siHBS-U6 對乙肝病毒復制和表達的抑制作用
    1 實驗材料
    2 實驗方法
    3 實驗結果
討論
全文總結
文獻綜述
參考文獻
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Combination of small interfering RNAs mediates greater inhibition of human hepatitis B virus replication and antigen expression[J]. 陳喆,許則豐,葉景佳,姚航平,鄭樹,丁佳逸.  Journal of Zhejiang University Science. 2005(04)
[2]Cost-effective method of siRNA preparation and its application to inhibit hepatitis B virus replication in HepG2 cells[J]. Zhi-Kang Qian, Bao-Qin Xuan, Tai-Shan Min, Jian-Feng Xu, Lin Li, Wei-Da Huang, Department of Biochemistry, School of Life Sciences, Fudan University, 220 Handan Road, Shanghai 200433, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(09)
[3]RNA干擾技術抑制A549細胞表皮生長因子受體表達的研究[J]. 張敏,張新,白春學,陳杰,MinQ.Wei.  中華腫瘤雜志. 2004(12)
[4]病毒性肝炎防治方案[J].   中華傳染病雜志. 2001(01)



本文編號：3152470