背景:研究發(fā)現(xiàn)NOX4和Rho A都在纖維化中起重要作用且兩者相互調(diào)節(jié):在肺纖維化中,NOX4/ROS為Rho A/ROCK1信號(hào)通路的上游分子;在腎纖維化中,兩者恰好相反。目前未見(jiàn)兩者在肝纖維化中是否存在上述類似或其他調(diào)節(jié)機(jī)制的報(bào)道。我們前期研究發(fā)現(xiàn)熊果酸（UA）能通過(guò)下調(diào)肝星狀細(xì)胞（HSC）中NOX4/ROS的表達(dá),抑制Rho GTP酶家族成員中Rac1的表達(dá),逆轉(zhuǎn)肝纖維化。但UA對(duì)Rho GTP酶家族另一重要成員Rho A的作用未見(jiàn)報(bào)道。據(jù)此我們?cè)O(shè)想,Rho A/ROCK1有可能是除NOX4/ROS之外另一條在肝纖維化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起重要作用的信號(hào)通路,并且它們兩條信號(hào)通路之間可能存在相互調(diào)節(jié)作用;UA可能通過(guò)抑制HSC中Rho A/ROCK1信號(hào)通路的激活,進(jìn)而抑制NOX4/ROS與Rho A/ROCK1的相互作用而影響HSC的生物學(xué)行為,從而達(dá)到逆轉(zhuǎn)肝纖維化的目的。目的:探究NOX4/ROS和Rho A/ROCK1信號(hào)通路對(duì)HSC-T6細(xì)胞行為學(xué)的影響及它們之間的相互作用機(jī)制;觀察UA對(duì)兩條信號(hào)通路的影響,以闡明UA減輕肝纖維化過(guò)程中對(duì)HSC-T6細(xì)胞增殖、遷移、活化的可能機(jī)... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：71 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 研究方法
        2.2.1 主要液體配制
        2.2.2 HSC-T6細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.2.3 HSC-T6細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)及穩(wěn)定株篩選
        2.2.4 HSC-T6細(xì)胞的加藥處理
        2.2.5 細(xì)胞總蛋白的提取
        2.2.6 細(xì)胞總RNA的提取及cDNA合成
        2.2.7 熒光定量PCR
        2.2.8 Western blotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白表達(dá)
        2.2.9 F-actin免疫熒光染色
        2.2.10 細(xì)胞內(nèi)ROS測(cè)定
        2.2.11 MTS法檢測(cè)細(xì)胞活力
        2.2.12 TUNEL法檢測(cè)HSC-T6細(xì)胞凋亡
        2.2.13 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)
        2.2.14 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)
        2.2.15 免疫共沉淀法（Co IP）檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)蛋白相互結(jié)合
        2.2.16 Biacore法檢測(cè)體外純蛋白間相互作用
    2.3 結(jié)果分析與統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 基于慢病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)的穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建及鑒定
        3.1.1 NOX4干擾（NOX4i）慢病毒轉(zhuǎn)染及鑒定
        3.1.2 RhoA干擾（RhoAi）慢病毒轉(zhuǎn)染及鑒定
        3.1.3 NOX4過(guò)表達(dá)（NOX4OE）慢病毒轉(zhuǎn)染及鑒定
    3.2 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞增殖、凋亡的影響
        3.2.1 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞增殖的影響
        3.2.2 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞凋亡的影響
    3.3 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞遷移、侵襲的影響
        3.3.1 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞遷移的影響
        3.3.2 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)的影響
    3.4 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響
    3.5 NOX4與RhoA對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞細(xì)胞骨架F-actin的影響
    3.6 UA干預(yù)對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信號(hào)通路相關(guān)基因m RNA表達(dá)的影響
    3.7 UA干預(yù)對(duì)TGF-β1 導(dǎo)致的HSC-T6細(xì)胞NOX4/ROS及RhoA/ROCK1信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    3.8 NOX4與Rho A蛋白間相互作用
        3.8.1 NOX4OE穩(wěn)定細(xì)胞株內(nèi)NOX4及Rho A免疫共沉淀（Co IP）
        3.8.2 體外全長(zhǎng)NOX4與Rho A純蛋白Biacore蛋白互作分析
第4章 討論
    4.1 NOX4/ROS信號(hào)通路對(duì)HSC行為學(xué)及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    4.2 RhoA/ROCK1信號(hào)通路對(duì)HSC行為學(xué)影響及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    4.3 NOX4/ROS與RhoA/ROCK1信號(hào)通路相互調(diào)控的作用機(jī)制
    4.4 熊果酸（UA）抗纖維化機(jī)制及相關(guān)分子靶點(diǎn)
    4.5 實(shí)驗(yàn)存在的問(wèn)題與不足
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]熊果酸對(duì)肝星狀細(xì)胞內(nèi)活性氧產(chǎn)生的影響及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系[J]. 李博,李弼民,何文華,劉志堅(jiān),張焜和,陳江,劉戈云,張新華,朱萱.  廣東醫(yī)學(xué). 2011(11)



本文編號(hào)：3033513