隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,肝癌的發(fā)生率在過去十年間顯著增加,嚴(yán)重影響著人類的健康。肝癌常見的危險(xiǎn)因素包括乙肝病毒、丙肝病毒、黃曲霉素B1、煙草以及酒精。新近研究發(fā)現(xiàn)脂肪性肝病也是肝癌的危險(xiǎn)因素之一,大約有4%-22%的肝癌歸因于脂肪性肝病。脂肪性肝病被定義為肝臟內(nèi)脂肪病理性聚集,其第一個(gè)病理階段就是脂肪肝,當(dāng)肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積超過細(xì)胞總體積的5%時(shí)就可以診斷為脂肪肝。脂肪肝可繼續(xù)進(jìn)展為脂肪性肝炎,其病理表現(xiàn)為免疫細(xì)胞浸潤(rùn),肝細(xì)胞氣球樣變,細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)MDB（Mallory-Denk body）,血生化檢查谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase,AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase,ALT）增高。脂肪性肝炎可以直接發(fā)展成為肝癌,或者先發(fā)展成為肝硬化,進(jìn)而進(jìn)展為肝癌。因此,脂肪性肝炎目前被認(rèn)為是導(dǎo)致肝癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素,但對(duì)其發(fā)生發(fā)展機(jī)制所知仍然有限。目前研究認(rèn)為肝臟內(nèi)膽固醇堆積而引起的脂毒性和氧化應(yīng)激是造成正常肝臟發(fā)展為脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎（non-alcoholic steatohepatitis,NASH）甚至肝癌的重要原因。... 

【文章來源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pcDNA3.1（-）B質(zhì)粒圖譜

RIG-I促進(jìn)肝細(xì)胞膽固醇合成及增強(qiáng)脂肪肝進(jìn)展的機(jī)制研究-17-顯微鏡購(gòu)于Olympus公司。小鼠血清全自動(dòng)干式生化分析儀FDC-7000i購(gòu)于FUJIFILM公司。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1條件性基因敲除小鼠的構(gòu)建條件性敲除Rig-I基因的flox小鼠委托北京唯尚立德生物科技有限公司構(gòu)建。該公司運(yùn)用CRISPR技術(shù)，首先構(gòu)建Cas9/gRNA，選用活性較高的gRNA經(jīng)顯微注射小鼠受精卵進(jìn)而剪切Rig-I基因內(nèi)含子的DNA，同時(shí)提供同源模板Donor，通過DNA的同源重組修復(fù)在Rig-I基因第4外顯子兩側(cè)插入loxP（圖2-2）。通過對(duì)子代小鼠基因組PCR鑒定獲得陽(yáng)性雜合子小鼠，即Rig-Ifl/+小鼠。Rig-Ifl/+小鼠經(jīng)自交后得到Rig-Ifl/fl小鼠。圖2-2Rig-I基因敲除策略Figure2-2.Rig-IgeneknockoutstrategyB6.Cg-Tg(Alb-cre)21Mgn/J小鼠購(gòu)于美國(guó)JacksonLab公司，是肝細(xì)胞表達(dá)cre酶的小鼠。將適齡的Alb-cre小鼠與Rig-Ifl/fl小鼠雜交后得到肝細(xì)胞中Rig-I基因條件性敲除的Rig-Ifl/fl-Alb-cre（Rig-Ihep-/-）小鼠和同窩對(duì)照Rig-Ifl/fl小鼠。經(jīng)過Westernblot驗(yàn)證，Rig-Ihep-/-小鼠肝細(xì)胞無(wú)法表達(dá)RIG-I蛋白（圖2-3）。圖2-3Rig-I基因敲除效率Figure2-3.Rig-Igeneknockoutefficiency

RIG-I促進(jìn)肝細(xì)胞膽固醇合成及增強(qiáng)脂肪肝進(jìn)展的機(jī)制研究-17-顯微鏡購(gòu)于Olympus公司。小鼠血清全自動(dòng)干式生化分析儀FDC-7000i購(gòu)于FUJIFILM公司。2.2實(shí)驗(yàn)方法2.2.1條件性基因敲除小鼠的構(gòu)建條件性敲除Rig-I基因的flox小鼠委托北京唯尚立德生物科技有限公司構(gòu)建。該公司運(yùn)用CRISPR技術(shù)，首先構(gòu)建Cas9/gRNA，選用活性較高的gRNA經(jīng)顯微注射小鼠受精卵進(jìn)而剪切Rig-I基因內(nèi)含子的DNA，同時(shí)提供同源模板Donor，通過DNA的同源重組修復(fù)在Rig-I基因第4外顯子兩側(cè)插入loxP（圖2-2）。通過對(duì)子代小鼠基因組PCR鑒定獲得陽(yáng)性雜合子小鼠，即Rig-Ifl/+小鼠。Rig-Ifl/+小鼠經(jīng)自交后得到Rig-Ifl/fl小鼠。圖2-2Rig-I基因敲除策略Figure2-2.Rig-IgeneknockoutstrategyB6.Cg-Tg(Alb-cre)21Mgn/J小鼠購(gòu)于美國(guó)JacksonLab公司，是肝細(xì)胞表達(dá)cre酶的小鼠。將適齡的Alb-cre小鼠與Rig-Ifl/fl小鼠雜交后得到肝細(xì)胞中Rig-I基因條件性敲除的Rig-Ifl/fl-Alb-cre（Rig-Ihep-/-）小鼠和同窩對(duì)照Rig-Ifl/fl小鼠。經(jīng)過Westernblot驗(yàn)證，Rig-Ihep-/-小鼠肝細(xì)胞無(wú)法表達(dá)RIG-I蛋白（圖2-3）。圖2-3Rig-I基因敲除效率Figure2-3.Rig-Igeneknockoutefficiency

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Modulation of hepatic steatosis by dietary fatty acids[J]. Alessandra Ferramosca,Vincenzo Zara.  World Journal of Gastroenterology. 2014(07)



本文編號(hào)：3033039