發(fā)布時(shí)間：2021-02-14 04:59

　　目的探討第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶張力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN）表達(dá)下調(diào)對(duì)體外培養(yǎng)的活化肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells,HSC）黏著斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）/p130Crk相關(guān)底物蛋白（p130Crk-associated substrate,p130Cas）及樁蛋白（paxillin）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。方法通過腺病毒反復(fù)感染AD293細(xì)胞,擴(kuò)增攜帶靶向PTEN的RNA干擾序列[短發(fā)夾RNA（short hairpin RNA,shRNA）]并表達(dá)綠色熒光蛋白（green fluorescent protein,GFP）的重組腺病毒Ad-sh RNA/PTEN及僅表達(dá)GFP的對(duì)照空病毒Ad-GFP,并測(cè)定病毒滴度;體外培養(yǎng)活化大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6,以腺病毒為載體,將靶向PTEN的RNA干擾序列（shRNA）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染活化HSC,敲減PTEN表達(dá),構(gòu)建HSC的PTEN低表達(dá)模型;采用Western blot技... 

【文章來源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

倒置熒光顯微鏡下腺病毒感染AD293細(xì)胞12h、24h的熒光表達(dá)(×100)

見 GFP 表達(dá)，24 h 有 GFP 表達(dá)的 AD2 h 出現(xiàn)廣泛 CPE，部分細(xì)胞已經(jīng)漂浮（見293 細(xì)胞 12 h GFP 表達(dá)；B: 腺病毒感染 AD293顯微鏡下腺病毒感染 AD293 細(xì)胞 12 h、24 h 的GFP at 12 and 24 hours after adenovirus infection iB

為 100 的 HSC 進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)（見圖 3）。注： A: 腺病毒感染 HSC 24 h 的 GFP 表達(dá)； B: 腺病毒感染 HSC 48 h 的 GFP 表達(dá)圖.3 倒置熒光顯微鏡下腺病毒（M.O.I. 100）感染 HSC 24 h、48 h 的熒光表達(dá) (×100)Fig. 3 Expressions of GFP at 24 and 48 hours after adenovirus infection in HSC at M.O.I. 100 (×100)1.3.4 靶向 PTEN 的 shRNA 下調(diào)活化 HSC 的 PTEN 表達(dá)1）腺病毒感染 HSC 48 h，實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)檢測(cè)各組 HSC 的 PTENmRNA 表達(dá)，以 Control 組 PTEN mRNA 表達(dá)量為 1，則 Ad-GFP 組和 Ad-shRNA/PTEN 組的 PTEN mRNA 相對(duì) Control 組的表達(dá)倍數(shù)分別為 1.01 倍、0.54倍，Ad-shRNA/PTEN 組 HSC 的 PTEN mRNA 表達(dá)明顯低于 Control 組及 Ad-GFP組（P＜0.05），而 Control 組與 Ad-GFP 組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表 1）。AB

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3033155