目的肝組織損傷是各型肝臟疾病的共同病理基礎(chǔ),嚴重的肝組織損傷將引起肝功能衰竭;干細胞治療修復(fù)肝組織損傷是目前國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界研究的一個熱點,但由于存在體外富集純化困難、定向分化機制不明等問題而使其應(yīng)用受到限制。胎肝細胞中富含的具有定向分化功能的干細胞是干細胞治療研究中的重要細胞來源。本研究擬探討建立體外擴增大鼠胚胎肝干細胞并抑制其分化的培養(yǎng)條件及方法,并在此基礎(chǔ)上,將胎肝干細胞通過門靜脈植入肝損傷大鼠體內(nèi),觀察肝臟修復(fù)情況,檢測治療前后HNF4α表達變化,探討HNF4α在胎肝干細胞促進肝組織損傷修復(fù)中的作用。本研究內(nèi)容共分為兩部分:1.體外瓊脂克隆培養(yǎng)對胎肝干細胞分化的影響;2.HNF4α在胎肝干細胞促肝組織損傷修復(fù)中的作用。探討這一重要調(diào)節(jié)過程中分子機理將為臨床應(yīng)用胎肝干細胞移植治療肝臟疾病奠定重要的基礎(chǔ)。方法1.無菌條件下利用Ⅳ型膠原酶結(jié)合機械消化法制備14d胎齡大鼠胎肝干細胞懸液。將原代分離得到的大鼠胎肝干細胞分成兩組,其中一組胚胎肝干細胞接種至Ⅰ型膠原包被的培養(yǎng)板中,常規(guī)貼壁培養(yǎng)。另一組細胞則接種至無血清軟瓊脂培養(yǎng)基中進行懸浮培養(yǎng);懸浮培養(yǎng)基分為上下兩層,底層為含HGF的1.2%瓊... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

胎肝干細胞懸浮培養(yǎng)與貼壁培養(yǎng)的比較

第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文P 表達明顯下降，ALB 的表達呈明顯上升的趨勢（P<0.01）。而懸浮培的胎肝干細胞 AFP 和 ALB 的表達在培養(yǎng)前后未見明顯變化（P>0.05）圖 5、6）

實時定量PCR分析AFPmRNA培養(yǎng)前后的表達變化


本文編號：2951016