丙型肝炎病毒（HCV）在全世界約有1.7億感染者，由于其疫苗難以研制且尚無特效藥，因此，對丙型肝炎的早期診斷是非常有意義的�，F(xiàn)階段對丙肝的常規(guī)診斷方法為PCR與ELISA，二者雖屬于成熟的檢測方式，但均較為耗時，操作繁瑣，HCV的檢測急需簡便且靈敏的方法。本文利用分子信標與金納米顆粒針對HCV病毒RNA做了一系列檢測及基因分型的實驗。首先是使用Duplex-specific nuclease（DSN）作為分子信標的信號放大工具，針對HCV RNA做了直接檢測。同時，還有利用該探針對HCV RNA的PCR產(chǎn)物進行檢測達到基因分型目的的實驗。另外，應用金納米顆粒，我們對HCVRNA做了靈敏而簡易的檢測。（1）通過DSN對MB與RNA的雜交產(chǎn)物進行酶切，可實現(xiàn)RNA的重復利用，雜交信號得到了放大。DSN能將MB的檢測靈敏度提高2000倍以上。對于JFH1RNA標準樣品，我們在較低的濃度下將其檢測了出來。然后，實驗檢測了huh7.5陽性細胞的RNA。對于血清RNA樣品，此體系也能區(qū)分其陰性與陽性，且信號強弱與ELISA結果一致。（2）利用MB對PCR產(chǎn)物進行檢測，即可知道模板除開引物外，其他位... 

【文章來源】：湖南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
第1章 緒論
    1.1 丙型肝炎的現(xiàn)狀
    1.2 丙型肝炎的常規(guī)檢測方式
        1.2.1 實時熒光定量 PCR
        1.2.2 酶聯(lián)免疫法
    1.3 分子信標的性質及其應用
        1.3.1 分子信標的基本原理與特點
        1.3.2 一些非常規(guī)的分子信標介紹
        1.3.3 分子信標的應用
        1.3.4 一些放大分子信標信號的方法
        1.3.5 本文關于 MB 檢測 HCV 的設想
    1.4 金納米顆粒的性質及其應用
        1.4.1 金納米顆粒的性質與特點
        1.4.2 金納米顆粒在生物及醫(yī)學方面的應用
        1.4.3 利用金納米顆粒針對 HCV RNA 的簡單檢測方法
        1.4.4 本文擬采用金顆粒檢測 JFH1 RNA 的實驗
第2章 分子信標與 DSN 對 HCV RNA 的超靈敏檢測
    2.1 前言
    2.2 實驗試劑與儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 JFH1 RNA 的體外轉錄
        2.3.2 JFH1 標準 RNA 與分子信標的雜交
        2.3.3 huh7.5 細胞系的培養(yǎng)、感染以及 RNA 提取
        2.3.4 血清 RNA 的提取
        2.3.5 RNA 的瓊脂糖凝膠電泳
        2.3.6 小片段靶點 RNA 與分子信標的雜交
        2.3.7 血清樣品的 ELISA 檢測
        2.3.8 在 DSN 的輔助下以分子信標檢測 RNA
        2.3.9 細胞 RNA 的樣品的 PCR 檢測
    2.4 實驗結果與討論
        2.4.1 分子信標與 JFH1 RNA 的雜交反應
        2.4.2 DSN 對分子信標信號放大的可行性探究
        2.4.3 DSN 與分子信標檢測 RNA 時的條件優(yōu)化
        2.4.4 DSN 對分子信標檢測 RNA 放大效率的檢測
        2.4.5 DSN 與分子信標對 JFH1 RNA 在較低濃度的檢測
        2.4.6 DSN 與分子信標對 huh7.5 陽性細胞中 HCV RNA 的檢測
        2.4.7 DSN 與分子信標對血清樣品中 HCV RNA 的檢測
    2.5 本章小結
第3章 利用分子信標針對 HCV 的基因分型
    3.1 引言
    3.2 實驗試劑及儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 逆轉錄與普通 PCR
        3.3.2 瓊脂糖凝膠電泳
        3.3.3 分子信標與 PCR 產(chǎn)物的雜交反應
    3.4 實驗結果
        3.4.1 分子信標與 PCR 產(chǎn)物雜交的可行性探究
        3.4.2 分子信標與 PCR 產(chǎn)物雜交的條件優(yōu)化
        3.4.3 分子信標分別檢測 H77S 與 JFH1 PCR 產(chǎn)物
    3.5 本章小結
第4章 利用金納米顆粒對 JFH1 RNA 的直接檢測
    4.1 引言
    4.2 實驗試劑與儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 金納米顆粒檢測體系的建立
        4.3.2 在此檢測體系中 JFH1 RNA 與引物的雜交
        4.3.3 反應結束后金顆粒體系的吸光度測定
    4.4 實驗結果
        4.4.1 金納米顆粒檢測 JFH1 RNA 的可行性研究
        4.4.2 金納米顆粒檢測 JFH1 RNA 實驗的條件優(yōu)化
        4.4.3 金納米顆粒對 JFH1 RNA 的檢測
        4.4.4 在復雜體系中金納米顆粒對 JFH1 RNA 的檢測
    4.5 本章小結
結論與展望
參考文獻
附錄 攻讀學位期間參與項目及發(fā)表論文
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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[3]NASBA熒光分子信標技術定量檢測丙型肝炎病毒[J]. 王虹,陳金華,曾位森,劉丹,楊艷妮,蔣平,謝曙光.  中國生物工程雜志. 2003(12)
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[5]納米金修飾玻碳電極在抗壞血酸共存下選擇性測定多巴胺[J]. 張宏,桂學琴,金葆康.  分析科學學報. 2002(03)



本文編號：2938217