發(fā)布時(shí)間：2020-12-22 12:28

　　肝纖維化是多種慢性肝病的共同病理基礎(chǔ),是進(jìn)一步向肝硬化發(fā)展的中心環(huán)節(jié),有關(guān)肝纖維化機(jī)理方面的研究無論是在細(xì)胞水平上還是在大分子水平上都已經(jīng)相當(dāng)深入,但是在對于細(xì)胞代謝和生命活動有著重要影響的小分子及其與大分子作用關(guān)系方面的關(guān)注甚少,尤其是對于核苷酸池的性質(zhì)、動力學(xué)特征以及它與基因表達(dá)和纖維化進(jìn)程的關(guān)系的研究尚屬空白。本研究探索了纖維化過程中核苷酸池的性質(zhì)、特點(diǎn)和動力學(xué)特征及其與病理過程和差異表達(dá)基因間的關(guān)系,同時(shí)也為纖維化及外源核苷酸緩解纖維化進(jìn)程的作用機(jī)理提供了新的認(rèn)識。采用CCl4誘導(dǎo)的方法建立肝纖維化小鼠模型,肝纖維化進(jìn)程的衡量指標(biāo)為AST、ALT酶活性和肝組織切片觀測。采用HPLC法系統(tǒng)地測定了纖維化過程中CCl4誘導(dǎo)的小鼠和正常小鼠細(xì)胞內(nèi)的核苷酸含量。有關(guān)CCl4誘導(dǎo)的纖維化小鼠的核酸池(代表性差異表達(dá)基因)數(shù)據(jù)是從Ensemb1、BioGPS數(shù)據(jù)庫和文獻(xiàn)中收集整理的。采用熒光定量PCR技術(shù)測定了核苷酸三個(gè)代謝途徑的關(guān)鍵酶基因和7個(gè)小鼠肝纖維化相關(guān)基因的表達(dá)水平。一磷酸核苷酸(NMP)的含量,AST/ALT的比值以及代表性差異表達(dá)基因數(shù)據(jù)用來分析核苷酸池、核酸池和纖維化進(jìn)程三... 

【文章來源】：南京師范大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：115 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肝纖維化綜述
    1.2 核苷酸池綜述
        1.2.1 核苷酸的概述
        1.2.2 核苷酸的種類
        1.2.3 核苷酸的功能
        1.2.4 核苷酸池的研究進(jìn)展
        1.2.5 核苷酸代謝
            1.2.5.1 核苷酸的合成代謝
                1.2.5.1.1 嘌呤核苷酸的合成代謝
                1.2.5.1.2 嘌呤核苷酸的挽救途徑
                1.2.5.1.3 嘧啶核苷酸的合成代謝
                1.2.5.1.4 嘧啶核苷酸的挽救途徑
            1.2.5.2 核苷酸的分解代謝
                1.2.5.2.1 嘌呤核苷酸的分解代謝
                1.2.5.2.2 嘧啶核苷酸的分解代謝
    1.3 討論
第2章 肝損傷過程中核酸池的變化
    2.1 肝損傷過程中表達(dá)變化的基因
    2.2 肝損傷過程中基因表達(dá)變化的總結(jié)
        2.2.1 肝損傷過程中表達(dá)變化的基因
            2.2.1.1 肝損傷過程中表達(dá)上調(diào)的基因
            2.2.1.2 肝損傷過程中表達(dá)下調(diào)的基因
        2.2.2 肝損傷不同時(shí)期基因表達(dá)變化的特征
4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠核酸池表達(dá)變化的特征">        2.2.3 CCl₄誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠核酸池表達(dá)變化的特征
    2.3 討論
第3章 肝纖維化過程中核苷酸池的變化
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動物
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.4 動物模型
        3.1.5 血漿樣品制備
        3.1.6 肝臟切片制備
        3.1.7 肝臟樣品制備
        3.1.8 色譜標(biāo)準(zhǔn)液配制
        3.1.9 色譜條件
        3.1.10 統(tǒng)計(jì)處理
    3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.2.1 小鼠日常觀察
        3.2.2 血漿轉(zhuǎn)氨酶檢測
            3.2.2.1 AST檢測結(jié)果
            3.2.2.2 ALT檢測結(jié)果
            3.2.2.3 AST/ALT比值
        3.2.3 組織切片觀測
        3.2.4 核苷酸池檢測
            3.2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線
            3.2.4.2 色譜實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.2.4.3 各類核苷酸含量的變化
            3.2.4.4 NMP、NDP、NTP含量的變化
            3.2.4.5 TAN、TGN、TUN、TCN含量的變化
            3.2.4.6 核苷酸總量的變化
    3.3 討論
第4章 核苷酸代謝關(guān)鍵酶基因及纖維化相關(guān)重要基因的表達(dá)水平研究
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.4 肝臟RNA樣品制備
        4.1.5 反轉(zhuǎn)錄過程
        4.1.6 熒光定量條件
        4.1.7 統(tǒng)計(jì)處理
    4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.2.0 RNA樣品質(zhì)量
        4.2.1 小鼠核苷酸代謝途徑關(guān)鍵酶基因表達(dá)水平測定結(jié)果
        4.2.2 小鼠肝纖維化差異表達(dá)基因表達(dá)水平測定結(jié)果
    4.3 結(jié)果分析
        4.3.1 小鼠核苷酸代謝途徑關(guān)鍵酶基因相對表達(dá)水平結(jié)果分析
            4.3.1.1 HGPRT相對表達(dá)水平分析
            4.3.1.2 Aprt相對表達(dá)水平分析
            4.3.1.3 Cps1相對表達(dá)水平分析
            4.3.1.4 Dpyd表達(dá)水平分析
            4.3.1.5 Prps2相對表達(dá)水平分析
        4.3.2 小鼠肝纖維化相關(guān)基因相對表達(dá)水平結(jié)果分析
            4.3.2.1 Mmp3相對表達(dá)水平分析
            4.3.2.2 Co16a1相對表達(dá)水平分析
            4.3.2.3 Egr1相對表達(dá)水平分析
            4.3.2.4 Mapk7相對表達(dá)水平分析
            4.3.2.5 Hnfla相對表達(dá)水平分析
            4.3.2.6 Cyp2a4相對表達(dá)水平分析
            4.3.2.7 Cyp2j9相對表達(dá)水平分析
    4.4 討論
第5章 核苷酸池、核酸池及纖維化進(jìn)程相關(guān)性研究
    5.1 核苷酸池內(nèi)核苷酸間的相關(guān)性分析
        5.1.1 NMP、NDP、NTP間的相關(guān)性
        5.1.2 AMP、GMP、UMP、CMP間的相關(guān)性
    5.2 核苷酸池與纖維化進(jìn)程相關(guān)性分析
    5.3 核苷酸池與核酸池相關(guān)性分析
        5.3.1 核苷酸池與Aprt表達(dá)水平相關(guān)性分析
        5.3.2 核苷酸池與核酸池相關(guān)性分析
    5.4 討論
第6章 全文總結(jié)
附錄
參考文獻(xiàn)
在讀期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：2931770