發(fā)布時(shí)間：2020-12-20 16:47

　　目的1.水動(dòng)力法構(gòu)建HBV持續(xù)復(fù)制型小鼠模型及其鑒定2.利用Cre-loxP重組系統(tǒng)建立誘導(dǎo)型HBV表達(dá)系統(tǒng)并制備誘導(dǎo)型HBV轉(zhuǎn)基因小鼠方法1.HBV持續(xù)復(fù)制型小鼠模型的建立（1）HBV1.3-56質(zhì)粒的鑒定：含1.3拷貝HBV基因組（血清型adw,基因型B）的質(zhì)粒HBV1.3-56（本實(shí)驗(yàn)室保管）酶切及測(cè)序鑒定后轉(zhuǎn)染Huh7肝癌細(xì)胞系,ELISA方法檢測(cè)HBsAg.HBeAg的分泌表達(dá)水平；Southern Blot檢測(cè)HBV復(fù)制；Northern Blot檢測(cè)HBV轉(zhuǎn)錄。（2）HBV持續(xù)復(fù)制型小鼠模型的建立：利用水動(dòng)力法將HBV1.3-56質(zhì)粒、陽(yáng)性對(duì)照1.3HBV質(zhì)粒（血清型ayw,基因型DE重組型）經(jīng)尾靜脈注射入BALB/c小鼠體內(nèi),注射后每周收集小鼠血清至第16周,ELISA檢測(cè)HBsAg.HBeAg表達(dá)水平；注射后第3天、7天、10天、14天和19天處死部分小鼠取肝臟,Southern Blot檢測(cè)HBV復(fù)制水平, Northern Blot檢測(cè)HBV轉(zhuǎn)錄水平。2.誘導(dǎo)型HBV表達(dá)系統(tǒng)的建立及其轉(zhuǎn)基因小鼠的制備（1）誘導(dǎo)型HBV表達(dá)系統(tǒng)的構(gòu)建：基于Cre-loxP重組系統(tǒng)和... 

【文章來(lái)源】：復(fù)旦大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

HBV基因結(jié)構(gòu)圖

圖2. HBV復(fù)制周期HBV分型乙肝病毒目前根據(jù)表面抗原（HBsAg) —個(gè)共同抗原決定簇a和2對(duì)亞決定族d/y及w/r分為四個(gè)血清型：adw，adr, ayw，ayr, HBsAg 226個(gè)殘基中第122位的賴(lài)氨酸/精氨酸殘基決定了亞抗原決定簇d/y，第160位的賴(lài)氨酸/精氨酸殘基決定了亞抗原決定簇w/r[10,ll]。但這一分型僅根據(jù)病毒外膜蛋白，并不能真正反映病毒基因組的差異。因此經(jīng)過(guò)許多學(xué)者的努力，確定了根據(jù)HBV全序列差異性28%將HBV分型的方法，目前已確定A-H八個(gè)基因型[12-15]。HBV基因型分布有明顯的地域特點(diǎn)。我國(guó)以B、C型為主[16]。HBV動(dòng)物模型研究雖然目前HBV研究己經(jīng)取得了很大進(jìn)展，但是由于缺乏合適的動(dòng)物模型，

內(nèi)注射入小鼠體內(nèi)，瞬間產(chǎn)生的液體壓力超過(guò)心輸出量，會(huì)使質(zhì)粒溶液通過(guò)下腔靜脈并以血液循環(huán)反方向通過(guò)門(mén)靜脈進(jìn)入肝臟，在其中表達(dá)（圖3) [32,33]。雖然短時(shí)間內(nèi)液體超負(fù)荷進(jìn)入小鼠體內(nèi)會(huì)導(dǎo)致小鼠心臟瞬間功能失調(diào)以及肝組織中血壓劇增、細(xì)胞膨脹以及結(jié)構(gòu)變形，但是小鼠的存活和生長(zhǎng)不受其影響[32,34]。其他載體介導(dǎo)方法相比，該方法簡(jiǎn)便、快速、有效且肝祀向性好，且在一些文獻(xiàn)報(bào)道中，基因可在水動(dòng)力注射處理過(guò)的動(dòng)物體內(nèi)持續(xù)表達(dá)[35-37],在基因功能和基因治療領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。通過(guò)該方法，HBVDNA不整合到小鼠基因組中，在肝臟中產(chǎn)生的病毒和病毒產(chǎn)物會(huì)引起宿主免疫反應(yīng)，有利于研究病毒4


本文編號(hào)：2928207