發(fā)布時間：2020-12-16 00:47

　　【目的】:制備雙砷染料標記的熒光乙型肝炎病毒（hepatits B virus,HBV）體,對其形態(tài)學進行鑒定分析,并動態(tài)觀察HBV熒光體在活細胞中的生物學行為�！痉椒ā�:采用脂質體介導的方法,將已成功構建帶有TC標簽的1.3倍乙型肝炎病毒基因組的載體質粒（pTHBV1.3-mTC1）瞬時轉染入人肝癌細胞株中,該重組載體是通過PCR定點基因突變技術將一個能與雙砷熒光染料特異性結合的TC標簽（C-C-P-G-C-C）在基因水平上插入到HBV核心蛋白免疫主區(qū)c/el位點。48h后通過間接免疫熒光檢測表面抗原在細胞內的表達與分布;酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測細胞培養(yǎng)上清液中乙肝表面抗原（HBsAg）的表達;同時收集轉染細胞上清液,經不連續(xù)蔗糖密度梯度離心進行分離和純化后,加抗體孵育進行免疫電鏡觀察分析,同等培養(yǎng)條件下HepG2細胞和2.2.15細胞培養(yǎng)上清液分別作為陰性和陽性對照�；罴毎芯恐�,我們應用Oregon Green ? 488 Taxol標記微管骨架后,在活細胞時差共聚焦顯微鏡下觀察熒光HBV病毒體在宿主細胞中的運輸過程�！窘Y果】:間接免疫熒光結果顯示在轉染pTHBV1.3... 

【文章來源】：華中科技大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

擴增后兩種質粒DNA的電泳鑒定

本部分圖片：1 M 210000bp7000bp4000bp2000bp1000bp500bp250bp圖 1：擴增后兩種質粒 DNA 的電泳鑒定: MarkerDL10000；1：突變質粒 pTHBV1.3-mTC1，共三個復孔；2：野生THBV1.3，共三個復孔

圖 3：表面抗原在細胞內的表達及與雙砷染料的共定位分別用相差顯微鏡和共聚焦顯微鏡拍攝，1：轉染野生型質粒 pTHBV1.3 組；2：轉突變質粒 pTHBV1.3-mTC1 組；3：未轉染空白對照組。DAPI(細胞核染料，藍色抗表面抗原抗體（綠色），ReAsH（雙砷染料，紅色）。（標尺：50μm）圖 4：共聚焦顯微鏡觀察轉染 48h 后培養(yǎng)上清懸液中雙砷標記結果左圖為轉染野生型質粒 pTHBV1.3 組培養(yǎng)上清液；右圖為轉染 pTHBV1.3-mTC培養(yǎng)上清液。兩者顯示明顯的熒光強度差異，顯示此熒光為特異性標記。（b50μm）


本文編號：2919206