目的探討過(guò)表達(dá)的野生型第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶張力蛋白同源物基因（phosphatase and tensin homology deleted on chromosome Ten,PTEN）及其突變體G129E基因（無(wú)脂質(zhì)磷酸酶活性而只具有蛋白磷酸酶活性）對(duì)體外培養(yǎng)的活化肝星狀細(xì)胞（hepatic stellate cells,HSC）的黏著斑激酶（focal adhesion kinase,FAK）/p130 Crk相關(guān)底物蛋白（p130 Crk-associated substrate,p130Cas）及樁蛋白（paxillin）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。方法利用腺病毒反復(fù)感染AD293的方法擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)所需的腺病毒（Ad-GFP、AdPTEN、Ad-G129E）,分別測(cè)定三組病毒滴度;體外培養(yǎng)的活化大鼠HSC細(xì)胞系（HSC-T6株）,通過(guò)腺病毒作為載體將靶向雙重磷酸酶活性的野生型PTEN基因及其只具有蛋白磷酸酶活性的突變體G129E基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至活化HSC;采用Western blot檢測(cè)活化HSC的PTEN、FAK、磷酸化FAK（Thr397）[phosphorylated FAK（Th... 

【文章來(lái)源】：華北理工大學(xué)河北省

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

倒置相差顯微鏡下腺病毒感染AD293細(xì)胞72h出現(xiàn)完全病變效應(yīng)

當(dāng)基因研究及治療要求載體感染效率＞80%，在倒置熒光顯微鏡計(jì)數(shù)顯示當(dāng)M.O.I. 100 時(shí) Ad-GFP、Ad-PTEN 和 Ad-G129E 感染 HSC 的感染效率達(dá)到要求，因此，將選取 M.O.I.為 100 進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)（見 Fig.4）。注：A: 腺病毒感染 HSC 12h 的熒光表達(dá)；B: 腺病毒感染 HSC 24h 的熒光表達(dá)；C: 腺病毒感染 HSC 48h 的熒光表達(dá)。圖.3 倒置熒光顯微鏡下腺病毒（M.O.I. 100）感染 HSC 12、24、48h 的熒光表達(dá)Fig.3 Expressions of GFP at 12, 24 and 48 hours after adenovirus infection in HSC at M.O.I. 100

ΔCt ΔΔC tRelative expression fold of FAKmRNA compared to control 2.811±0.047 0 1 2.843±0.029 0.032 0.977 2.828±0.049 0.017 0.988 組 2.820±0.053 0.009 0.994 Western blot 技術(shù)檢測(cè)腺病毒感染 HSC 48h 時(shí)各組TEN 組（0.824±0.024）、Ad-G129E 組（0.801±0.028）及 Ad-GFP（0.819±0.020），顯然各組之間 HS異，P＞0.05（見 Fig.6）。Control Ad-GFP Ad-PTEN Ad-G129EF


本文編號(hào)：2918857