研究背景:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMMSCs）是骨髓中一種非造血類的干細(xì)胞。近些年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn),間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells,MSCs）由于具有多向分化潛能、低免疫原性和易于體外擴(kuò)增等特點(diǎn),受到醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域的廣泛關(guān)注。應(yīng)用骨髓MSCs移植進(jìn)行細(xì)胞替代治療,目前已被廣泛應(yīng)用于缺血或損傷性疾病以及器官移植、抗免疫排斥反應(yīng)等研究領(lǐng)域,并取得了初步效果。因此,干細(xì)胞替代治療有望成為臨床上一種新的治療手段。目的:體外培養(yǎng)和擴(kuò)增的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)損傷胃黏膜的修復(fù)作用及其機(jī)制研究。方法:1、分別采用全骨髓貼壁法和密度梯度離心法體外培養(yǎng)和擴(kuò)增Wistar大鼠的骨髓MSCs,應(yīng)用MTT方法比較兩種方法下骨髓MSCs的自然生長(zhǎng)曲線,流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓MSCs表面標(biāo)志物,對(duì)培養(yǎng)、純化的骨髓MSCs進(jìn)行鑒定。2、以活體染料羥基熒光素乙酰乙酸（5,6-carboxyfluoresceindiacetate succinimidyl ester,CFDA SE）體外標(biāo)記骨髓MSCs,熒光顯微鏡下、488nm波長(zhǎng)激發(fā)光... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

胃，髓MSCs第2代(X200)

軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院博十學(xué)位論文結(jié)果一、原代和傳代培養(yǎng)的大鼠骨髓MSCs的形態(tài)學(xué)觀察(見(jiàn)圖1.1一L3)(一)全骨髓貼壁法分離大鼠骨髓MSCs從大鼠抽取骨髓制成細(xì)胞懸液，剛開(kāi)始接種于培養(yǎng)瓶時(shí)，夾雜大量的造血干細(xì)胞、紅細(xì)胞，由于造血干細(xì)胞、紅細(xì)胞不貼壁，因此可以根據(jù)此特性通過(guò)換液逐漸將其清除。于細(xì)胞生長(zhǎng)48小時(shí)后可見(jiàn)細(xì)胞30%貼壁，貼壁的細(xì)胞形態(tài)各異，呈圓形、短棒形或多角形，經(jīng)第一次換液后，細(xì)胞增殖加快，其增殖速度明顯快于密度梯度離心法。5天時(shí)可見(jiàn)有50%細(xì)胞貼壁，7一10天細(xì)胞達(dá)70%一80%融合，逐漸舒展呈現(xiàn)多種形態(tài)，并可見(jiàn)細(xì)胞克隆的形成。細(xì)胞以多角和長(zhǎng)梭形為主

髓MSCS第3代(x100)骨髓MSC，生長(zhǎng)曲線髓貼壁法和密度梯度離心法兩者在細(xì)胞接種后第1一3天細(xì)，為細(xì)胞生長(zhǎng)的潛伏期，3天后細(xì)胞生長(zhǎng)加速，有一快速生生長(zhǎng)期，于7一9天時(shí)，細(xì)胞數(shù)達(dá)最高值，為細(xì)胞生長(zhǎng)平臺(tái)期速度減慢。全骨髓貼壁法所獲骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞第1天OD梯度離心法;細(xì)胞從第3天起增殖加快，進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期，度梯度離心法;至第9天，細(xì)胞增殖明顯減慢進(jìn)入平臺(tái)期。培養(yǎng)開(kāi)始3天時(shí)，密度梯度離心法生長(zhǎng)速度明顯高于全骨髓1)，此后兩種方法下細(xì)胞生長(zhǎng)速度無(wú)明顯差異(P>0.05)。(見(jiàn)表1.1MTT法骨髓MSCs生長(zhǎng)曲線測(cè)定結(jié)果(OD值)(萬(wàn)士S)


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