目的:非酒精性脂肪性肝病(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)已成為全球第一大慢性肝臟疾病,是一個重大的公共健康問題。非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)作為NAFLD的亞型,已經(jīng)成為非肝硬化性肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)最主要的病因。因此,早期篩查出NAFLD患者和明確是否進展為NASH具有十分重要的意義。腹部超聲檢查雖為NAFLD一線篩查工具,當脂肪含量低于30%時,其靈敏度將大幅度下降。肝活檢雖為診斷NASH的唯一可靠的微創(chuàng)性、金標準試驗,然而成本高、侵入性、風險性、并發(fā)癥、依從性低、取樣誤差等限制了其臨床應用。此外,迄今仍缺乏對于NASH的高敏感度、高特異度診斷指標,在臨床上缺乏可用于NASH診斷的公認標志物。本課題旨在利用與NAFLD相關的常用臨床及實驗室指標,構建無創(chuàng)性診斷模型,并評估該模型對NAFLD的預測和診斷價值,以及探討模型的臨床應用價值,為NAFLD的篩查提供新的參考標準;同時,在此基礎上進一步借助于生物信息學分析手段開展創(chuàng)新性探索,尋找NASH新的潛在無創(chuàng)性診斷標志物,為在篩查出NAFLD后盡早識別NASH提供更加科學、客觀和便捷的方法。方法:1選取2018年1月至2019年1月西安醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院診斷為NAFLD患者141例和健康對照者30例為研究對象,記錄研究對象的病史、體重、身高、體質指數(shù)(BMI);測定并收集谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、谷氨酰轉肽酶(GGT)、血尿素氮(BUN)、血尿酸(UA)、血肌酐(CR)、血漿總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、糖化血紅蛋白(HBA1c)、游離脂肪酸(FFA)、空腹血糖(FPG)、空腹胰島素(FINS)、血小板(PLT)、超聲檢查結果和Fibroscan的檢查結果等數(shù)據(jù)。計量資料組間比較采用t檢驗,相關性使用Pearson相關性分析,回歸模型的構建使用多元線性回歸方程模型,構建受試者工作特征曲線(ROC曲線),計算回歸模型的靈敏度和特異度以及曲線下面積(AUC)。進一步以肝活檢的結果為參考,在此基礎上比較診斷模型和Fibroscan的診斷效能。2通過基因表達綜合數(shù)據(jù)庫(Gene Expression Omnibus,GEO)獲取關于NASH的基因表達芯片數(shù)據(jù),進一步通過GEO2R分析手段獲得NASH和正常組織的差異基因(DEGs,differentially expressed genes)。隨后,對這些DEGs進行功能富集分析,包括GO分析(Gene Ontology)和KEGG分析(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes),同時借助于蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡圖分析手段(PPI,protein-protein interaction),以尋找NASH發(fā)生和發(fā)展的潛在分子作用機制及新的診斷標志物。結果:1與脂肪肝相關的指標包括BMI(r=0.436,P0.01)、ALT(r=0.356,P0.01)、AST(r=0.317,P0.01)、UA(r=0.250,P0.01);所構造的NAFLD回歸模型為:CAP=148.537+0.396*ALT+4.593*BMI,診斷模型的ROC曲線下面積為0.927,靈敏度為87.68%,特異度為90.00%,臨界值(cut-off value)為277.67,P?0.01,具有較高的診斷效能。診斷模型的準確率(82.6%)高于Fibroscan的準確率(69.6%),差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。2通過生物信息學分析,最終發(fā)現(xiàn)514個DEGs以及11個在NASH差異表達的關鍵基因(hub gene)。其中3個關鍵基因(CAT、ALDH2、ALDH8A1)與肝癌的生存分析密切相關,可能與NASH發(fā)展到HCC密切相關。結論:1與目前已有的診斷模型相比,本研究所建立的模型ROC曲線下面積、特異度、靈敏度均較佳,計算方法最為簡單,實用性及可操作性強,并且準確性高于Fibroscan,有利于對早期NAFLD進行便捷篩查,提高自我干預意識,進一步降低NAFLD的危害和疾病進程,以及減少醫(yī)療資源消耗。可以作為一個NAFLD早期篩查的診斷手段,具有臨床應用及推廣的價值。2生物信息學分析的結果表明,NASH差異表達的11個關鍵基因,尤其是CAT、ALDH2、ALDH8A1在未來可能會成為NASH新的無創(chuàng)診斷標志物�；谂R床尚無可用NASH診斷標志物背景下,本項創(chuàng)新性研究可為未來該領域提供新的研究方向。
【學位單位】：西安醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2019
【中圖分類】：R575.5
【文章目錄】：
縮略詞表
摘要
abstract
前言
文獻回顧
第一部分 ：非酒精性脂肪性肝病初步篩查的診斷模型構建
    1.研究資料與方法
        1.1 研究對象與方法
        1.2 入組標準
        1.3 標本收集與檢測
        1.4 質量控制
        1.5 數(shù)據(jù)分析
        1.6 倫理學批準
    2 結果
        2.1 基本資料
        2.2 各生化指標之間差異性比較
        2.3 與肝臟脂肪含量相關的指標
        2.4 NAFLD診斷模型的構建
        2.5 ROC診斷曲線的構建
        2.6 診斷模型與Fibroscan的比較
        2.7 臨床篩查應用
    3 討論
    4 結論
第二部分 應用生信分析篩選非酒精性脂肪性肝炎無創(chuàng)診斷標志物
    1 研究對象和方法
        1.1 入組資料（芯片數(shù)據(jù)）
        1.2 數(shù)據(jù)篩選標準
        1.3 差異基因的功能富集
        1.4 蛋白互作網(wǎng)絡以及分子模型分析
        1.5 關鍵基因的選擇和分析
        1.6 統(tǒng)計學處理
    2 結果
        2.1 NASH患者差異基因篩選結果
        2.2 差異基因功能富集結果
        2.3 蛋白互作網(wǎng)絡以及分子模型分析結果
        2.4 關鍵基因的篩選和分析結果
    3 討論
    4 結論
不足與展望
致謝
參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果

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本文編號：2890902