HBV感染是世界范圍內重大的健康問題之一，部分的乙肝病毒感染者最終發(fā)展為肝硬化或肝癌。前期的研究認為在慢性乙型肝炎的發(fā)展過程中細胞免疫發(fā)揮了重要作用，尤其是HBV特異性的CD4+T以及CD8+T細胞在對HBV感染的控制中起至關重要的作用。隨著免疫學研究的進展，越來越多的免疫細胞被發(fā)現(xiàn)，它們通過復雜的機制，在慢性乙型肝炎的發(fā)生發(fā)展及臨床轉歸過程中發(fā)揮著重要作用。Th17和Treg細胞是兩種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細胞亞群，在功能上分別為促進和抑制免疫應答，研究發(fā)現(xiàn)在正常情況下兩種細胞處于一種免疫平衡狀態(tài)，但我們前期的研究結果顯示在慢性乙型肝炎患者體內這種平衡被打破。本實驗旨在探索聚乙二醇干擾素治療慢性乙肝的過程中，T輔助細胞(Th1、Th2、Th17和Treg細胞)的變化特征以及在抗病毒治療過程中的動態(tài)變化規(guī)律，并分析Th17/Treg細胞免疫平衡在HBV持續(xù)感染的過程中所發(fā)揮的作用。 方法 選取未經抗HBV治療的HBeAg+慢性乙型肝炎患者11例，按常規(guī)劑量和方法給予聚乙二醇干擾素抗病毒治療48w，收集患者在基線、治療4、8、12、24、32、40、48周時的外周血，采用流式抗體進行細胞膜表面和胞內染色技術，運用流式細胞儀對其單個核細胞（PBMC）中Th1、Th2、Th17、Treg等細胞的表達水平進行動態(tài)檢測，同時在每個治療時間點檢測受試者的相關臨床指標（ALT，HBV-DNA，TB及乙肝表面標志物等），分析在抗病毒治療過程中各細胞的變化趨勢，并觀察相互之間是否具有相關性，及與HBV-DNA定量和ALT水平之間是否具有相關性。同時選取健康志愿者20例作為對照組。 結果 1.干擾素治療過程各時間點外周血Th17、Treg、Th1、Th2細胞的變化趨勢：在治療前8周，Th17細胞呈上升趨勢，在8周至40周期間呈現(xiàn)為折線形波動，至48周時又出現(xiàn)緩慢升高。Treg細胞則于前4周快速升高，4周到8周時又迅速下降，前8周內以第4周為分界出現(xiàn)倒"V"形變化，隨后呈緩慢波動，無明顯升降趨勢。在治療過程中，Th17細胞在4周、8周、48周時的表達頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學意義（p0.05），其中24周時的表達頻率較基線相比差異更為明顯（p0.01）。Treg細胞僅治療4周時的表達頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學意義（p0.05）。在干擾素治療前4周，Th1細胞呈快速下降趨勢，治療4-24周期間，其表達出現(xiàn)緩慢波動，24周后又呈現(xiàn)出明顯升高趨勢，至40周后則快速下降，Th2細胞在治療過程中表現(xiàn)為水平狀波動趨勢，無明顯變化。在治療過程中，Th1細胞在4周、8周、12周、24周、48周時的表達頻率與基線相比有明顯統(tǒng)計學差異（p0.001），治療32周、40周時的表達頻率較基線相比差異有統(tǒng)計學意義（p0.05）。Th2細胞在治療8周、24周、40周時的表達頻率與基線相比差異有統(tǒng)計學意義（p0.05）。統(tǒng)計結果顯示，Th17細胞在CHB患者中的表達頻率明顯高于健康對照組（p0.05），Th2細胞在CHB組中的表達明顯高于HC組(p0.05)。CHB組中的Th17/Treg比率與HC組相比明顯升高（p0.01），Th1/Th2細胞比率與HC組相比降低（p0.05）。 2.以治療48周時HBeAg下降至1COI為界分為eAg陽性組（1COI）和eAg轉換組（1COI），分析eAg血清學轉換患者及eAg陽性患者外周血各細胞比例的差異：在干擾素治療前4周，兩組中的Th1細胞均呈現(xiàn)明顯下降趨勢，在治療4周到40周期間表現(xiàn)為波動狀上升趨勢，至治療48周時，兩組中Th1細胞的表達又迅速降低，整體表現(xiàn)為下降趨勢，兩組沒有明顯差別（p0.05）。在治療前8周，eAg轉換組中Th2細胞呈明顯上升趨勢，之后出現(xiàn)緩慢波動，至治療40周后明顯下降，eAg陽性組則始終表現(xiàn)為水平波動趨勢，至治療40周后，也表現(xiàn)為明顯下降。在治療前8周，兩組中Th17細胞均表現(xiàn)為明顯上升趨勢，之后eAg陽性組繼續(xù)出現(xiàn)上升趨勢，至治療24周后明顯下降,eAg轉換組則始終呈水平波動趨勢，兩組在治療48周時Th17細胞的比例達到相似水平。在治療前4周，兩組中Treg細胞呈明顯上升趨勢，之后兩組均呈現(xiàn)波動狀下降趨勢。 3.在peg-IFN治療過程中外周血中各細胞比例與HBV-DNA、ALT的相關性分析：經Pearson correlation統(tǒng)計分析，結果顯示Th1與Treg細胞比例在基線時表現(xiàn)為顯著正相關性(p0.001)，TH2與TH17細胞在基線時也表現(xiàn)為正相關（p0.05），在治療過程中Th17與Treg細胞、Th1與Th2細胞的變化均呈相反趨勢，Th17細胞與Treg細胞在治療24周、32周時呈負相關性（p0.05），Th1細胞與Th2細胞在治療24周時表現(xiàn)為負相關（p0.05）。在治療12周及24周時，Th17/Treg比例與HBV-DNA之間呈負相關(p0.05)，Th1/Th2比例與HBV-DNA之間無明顯相關性, Th1細胞與Th17細胞在治療12周時均與HBV-DNA定量間存在正相關性(p0.05)。 結論 在慢性乙型肝炎患者體內，Th17細胞處于功能活躍狀態(tài)，而Treg細胞處于功能抑制狀態(tài)，這一平衡紊亂在一定程度上與病情嚴重程度相關。在聚乙二醇干擾素抗病毒治療的過程中，Th17與Treg細胞、Th1與Th2細胞的變化均呈相反趨勢，統(tǒng)計結果顯示在治療12周和24周時Th17/Treg比值與HBV-DNA載量呈負相關，故我們推測這一比率的變化在治療過程中與乙肝病毒載量下降有關，Th17/Treg不平衡在乙肝病毒持續(xù)存在的過程中扮演了重要角色。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R512.62
【部分圖文】：

19圖 3-1 a) Th17 細胞（CD4+IFN-γ+T）的比例；b)Treg 細胞（CD4+I細胞（CD4+IL-17+T）的比例；d)Th1 細胞（CD4+CD25+Foxp3+T）Fig3-1 a)The gating of Th17 cells (CD4+IL-17+T) proportion; b)The g(CD4+CD25+Foxp3+T)proportion; c)The gating of Th1 cells (CD4+IFNd)The gating of Th2 cells (CD4+IL-4+T) proportion

20圖 3-2 (A)健康對照和 CHB 患者體內 Th17 細胞和 Treg 細胞的百分比；(B)健康對照和 患者體內 Th1 細胞和 Th2 細胞的百分比；(C)健康對照和 CHB 患者體內 Th17/Treg 細胞Th1/Th2 細胞的比率Fig3-2 (A)Pooled data indicate the percentages of Th17 cells and Treg cells in HC and CHpatients. (B)Pooled data indicate the percentages of Th1 cells and Th2 cells in HC and CHpatients. (C)The ratio fo circulating Th17 cells to Treg cells, Th1 cells to Th2 cells in HC anCHB patients. Horizontal bars represent the median values of indicated index.如圖 3-1 所示，我們用流式細胞儀檢測了健康人群及慢乙肝患者外周血中

圖 3-4 (A) Th17/Treg 細胞的比值在干擾素治療各時間點的變化趨勢；(B)Th1/Th2 細胞的比值在干擾素治療各時間點的變化趨勢Fig3-4(A) The change trend of Th17 /Treg ratios at each time point treated by interferon; (B)The change trend of Th1 /Th2 ratios at each time point treated by interferonNotes: Value with *and**differ significantly at P<0.05 and P<0.01 respectively compared withthe baseline.將干擾素治療各時間點 Th1/Th2 細胞以及 Th17/Treg 細胞比值的變化趨勢進行分析，圖 3-4(A)顯示，在治療前 8 周，Th17/Treg 細胞比值逐漸上升，在 8 周至40 周期間呈現(xiàn)為"W"折線形波動，40 周至 48 周時呈水平狀態(tài)。圖 3-4(B)所示，Th1/Th2 細胞比例于治療前 8 周內快速升高，至第 8 周時下降至最低點，隨后緩慢升高至 40 周，40 到 48 周時又出現(xiàn)下降趨勢。如圖可見在治療過程中，Th17/Treg細胞比率在 8 周、24 周時與基線相比差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。Th1/Th2 細胞比率在治療 4 周、24 周、40 周時與基線相比差異有統(tǒng)計學意義（p<0.05），在 8周時差異更為明顯（p<0.01）。
【共引文獻】

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本文編號：2890741