發(fā)布時間：2020-11-16 22:54

　　 背景和目的：在全球范圍內(nèi)，酒精性肝病是導(dǎo)致疾病及死亡的一個重要原因。其病理類型主要包括脂肪肝、肝臟炎癥及壞死、進展性肝纖維化，甚至發(fā)展為原發(fā)性肝細胞癌。雖然現(xiàn)在公認持續(xù)性飲酒可導(dǎo)致酒精性肝病，但并不是所有的酗酒者均進展為臨床癥狀明顯的肝損傷。其他因素，例如性別、遺傳和環(huán)境因素在酒精性肝病發(fā)生中也起了重要作用。本項研究主要檢測內(nèi)毒素血癥在慢性酒精攝入大鼠模型中觸發(fā)肝臟纖維化的作用機制。 方法：將48只SD大鼠隨機分為酒精1組、酒精2組、對照1組、對照2組共四組，同時喂養(yǎng)等熱量的Lieber-Decarli配方的對照飼料和酒精飼料，1組喂養(yǎng)至8周，2組喂養(yǎng)至10周。采用光度法檢測大鼠門靜脈血漿LPS濃度。采用原位雜交方法檢測大鼠肝臟組織中的TLR4mRNA和TGF-β1mRNA。針對大鼠肝臟組織連續(xù)切片，采用免疫組織化學(xué)染色檢測FSP-1和Vimentin以確定HSC，檢測F4/80確認Kupffer細胞。應(yīng)用計算機圖像分析系統(tǒng)檢測FSP-1陽性HSC和TLR4mRNA陽性細胞的積分光密度值。采用Western blot檢測大鼠肝臟組織中I型膠原蛋白和α-平滑肌動蛋白。采用RT-PCR法檢測IL-1,IL-6, TNF-α and TGF-β1mRNA。采用HE染色和Masson三色染色法評估肝臟的組織學(xué)特點。 結(jié)果：Masson三色染色法顯示，和正常組大鼠相比，酒精攝入10周末大鼠出現(xiàn)不同程度的中央靜脈周圍肝血竇周邊纖維化，和Westernblot檢測的Collagen I蛋白表達相一致。免疫組化染色顯示在酒精攝入10周末大鼠肝臟組織有大量HSC和部分Kupffer細胞激活，而正常組肝臟僅有少量HSC表達。和10周末正常組大鼠相比，10周末酒精組大鼠門靜脈血漿內(nèi)毒素濃度明顯增加，然而，8周末酒精組大鼠門靜脈血漿內(nèi)毒素水平未見升高，提示飲酒時間越長，對腸道通透性影響越大。原位雜交顯示：酒精攝入10周末大鼠肝臟組織中大量肝細胞，部分HSC和少數(shù)Kupffer細胞表達TLR4mRNA，而10周末正常組大鼠或8周末酒精攝入大鼠僅見中央靜脈周邊內(nèi)皮細胞或數(shù)個肝細胞表達TLR4mRNA。雙變量相關(guān)分析結(jié)果顯示：10周末酒精組肝臟TLR4mRNA表達強度與門靜脈血漿LPS水平呈正相關(guān)(r=0.856; p0.05)。而且酒精喂養(yǎng)10周末大鼠肝臟的炎癥因子IL-1、IL-6、TNF-α及纖維源性因子TGF-β1基因轉(zhuǎn)錄水平較同期對照組增加。 結(jié)論：慢性酒精攝入可引起大鼠門靜脈血漿LPS濃度明顯升高，激活肝臟中HSC和Kupffer細胞上的TLR4信號通路，釋放炎性因子和纖維源性因子TGF-β1，協(xié)同作用于HSC，使其活化，進一步介導(dǎo)肝臟纖維化。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R575.5
【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 文獻綜述：LPS-TLR4 通路在慢性酒精攝入大鼠肝纖維化發(fā)生的作用
    2.1 ALD 的自然史、臨床及病理特點與發(fā)病機理：
    2.2 腸源性的細菌成分在 ALD 發(fā)病機制中的作用
    2.3 TLR4 與其配體的結(jié)構(gòu)特征、分布及功能
    2.4 LPS-TLR4 的信號傳導(dǎo)通路
第3章 實驗材料與方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 基本資料
        3.1.2 試劑及液體配置
        3.1.3 實驗儀器
    3.2 實驗方法
        3.2.1 HE 染色
        3.2.2 Masson 三色染色
        3.2.3 肝組織免疫組織化學(xué)檢測方法
        3.2.4 大鼠肝組織原位雜交檢測方法
        3.2.5 大鼠肝組織樣品 Western blot 檢測方法
        3.2.6 大鼠肝組織樣品 RT-PCR 檢測方法
        3.2.7 大鼠門靜脈血漿內(nèi)毒素 LPS 的檢測方法
        3.2.8 免疫組化 FSP-1 陽性 HSC 與原位雜交 TLR4 mRNA 陽性細胞圖像分析
    3.3 統(tǒng)計學(xué)方法
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 慢性酒精攝入大鼠肝臟病理學(xué)改變及纖維化特征
    4.2 慢性酒精攝入大鼠肝臟 HSC 和 Kupffer 細胞的激活
    4.3 酒精喂養(yǎng)大鼠門靜脈血漿內(nèi)毒素水平及其與肝臟 TLR4 信號通路關(guān)鍵因子的關(guān)系
        4.3.1 酒精喂養(yǎng)大鼠門靜脈血漿 LPS 水平的變化
        4.3.2 TLR4 mRNA 在酒精攝入大鼠肝臟組織中表達及分布特點
        4.3.3 酒精喂養(yǎng)大鼠門靜脈血漿內(nèi)毒素水平與肝臟 TLR4 mRNA 表達強度的關(guān)系
        4.3.4 酒精喂養(yǎng)大鼠肝臟 TLR4 通路應(yīng)答基因的表達
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻
導(dǎo)師及作者簡介
致謝

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 厲有名;;酒精性肝病的流行病學(xué)特點[J];實用肝臟病雜志;2012年03期

2 ;Hyaluronic acid fragments evoke Kupffer cells via TLR4 signaling pathway[J];Science in China(Series C:Life Sciences);2009年02期

3 黃艷;黃成;李俊;;肝纖維化病程中Kupffer細胞分泌的細胞因子對肝星狀細胞活化增殖、凋亡的調(diào)控[J];中國藥理學(xué)通報;2010年01期

4 陳潔;姜虹;;TLR4信號通路與炎性反應(yīng)[J];醫(yī)學(xué)綜述;2009年19期

本文編號：2886763