研究目的： 1、建立TNBS誘導(dǎo)的SD大鼠潰瘍性結(jié)腸炎模型和雙歧桿菌防治模型,為進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。 2、檢測(cè)腸黏膜上皮細(xì)胞中TLR2、TLR4、NF-кB的表達(dá)以對(duì)其在雙歧桿菌防治UC中的作用加以研究。 研究方法： 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及模型建立：將60只SD大鼠隨機(jī)分為三組,即空白對(duì)照組、UC模型組、雙歧桿菌組。常規(guī)適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后,空白對(duì)照組不予處理；UC模型組和雙歧桿菌組在第8天采用Morris報(bào)道的TNBS法造模：將UC模型組和雙歧桿菌組各20只大鼠禁食24h后,10%水合氯醛麻醉,TNBS (Sigma公司,劑量75mg/kg)和100%乙醇按1：1混合后灌腸造模。造模成功后,雙歧桿菌組大鼠給予口服雙歧桿菌菌液2ml/d,1次/d,持續(xù)3周。觀察各組大鼠的一般狀態(tài)。 2、一般情況及病理損傷檢測(cè)：3周后將所有三組大鼠禁食24h后處死,采集結(jié)腸標(biāo)本做病理組織切片,計(jì)算各組大鼠的一般狀況評(píng)分及組織損傷評(píng)分。 3、RT-PCR檢測(cè)TLR2、TLR4的表達(dá)：分離腸黏膜上皮細(xì)胞提取總RNA,用RT-PCR法檢測(cè)TLR-2、TLR-4的表達(dá)。 4、免疫組化檢測(cè)TLR-4、NF-кB的表達(dá)：制作石蠟切片,采用免疫組化染色檢測(cè)腸道中TLR-4、NF-кB的表達(dá)。 結(jié)果： 1、UC模型組大鼠自灌腸后15～24小時(shí)開始出現(xiàn)腹瀉,表現(xiàn)為黃色稀便和／或肛周體毛被稀便沾染,可持續(xù)3周以上；且病理切片顯示UC模型組大鼠腸道黏膜組織紊亂,有潰瘍形成�？瞻讓�(duì)照組和雙歧桿菌組無潰瘍形成,成功建立了UC模型及雙歧桿菌防治模型。對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS13.0軟件進(jìn)行多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis Test),測(cè)得P0.01,UC組大體狀況及病理學(xué)改變與雙歧桿菌組及空白對(duì)照組有顯著性差異,實(shí)驗(yàn)結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2、RT-PCR檢測(cè)：UC模型組大鼠腸黏膜上皮細(xì)胞中TLR2、TLR4的表達(dá)要高于空白對(duì)照組和雙歧桿菌組。 3、免疫組織化學(xué)檢測(cè)：免疫組化染色顯示UC模型組大鼠結(jié)腸黏膜細(xì)胞及固有層單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核可觀察到明顯棕色顆粒,NF-кB表達(dá)呈強(qiáng)陽性,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示模型組TLR-4、NF-кB的表達(dá)要高于空白對(duì)照組與雙歧桿菌組,且NF-кB表達(dá)與TLR4表達(dá)呈正相關(guān),結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。 結(jié)論及意義： 1、在通常情況下,腸道正常菌群與宿主之間存在著一種動(dòng)態(tài)的平衡,當(dāng)腸道正常菌群與宿主環(huán)境之間的平衡被打破,尤其是腸道中革蘭陰性細(xì)菌數(shù)量增加時(shí),腸道革蘭陰性細(xì)菌可以誘導(dǎo)腸黏膜上皮細(xì)胞上的TLR-4表達(dá)的增加,并可以通過與TLR-4結(jié)合引起細(xì)胞內(nèi)NF-кB的持續(xù)激活,進(jìn)而增加前炎癥因子(TNF-а、IL-1、IL-6)的表達(dá),最終在腸道的炎癥中發(fā)揮作用。 2、雙歧桿菌可能通過抑制腸黏膜上皮細(xì)胞上的TLR-2、TLR4的表達(dá)而引起NF-кB通路的阻滯,阻斷了NF-кB的轉(zhuǎn)錄活性,進(jìn)而阻滯了TNF-a、IL-1、IL-6的分泌,從而緩解腸道的炎癥反應(yīng)。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R574.62
【部分圖文】：

RT-PCR檢測(cè)TLR2電泳結(jié)果示意圖

免疫組化檢測(cè)空白對(duì)照組TLR4表達(dá)

圖8免疫組化檢測(cè)雙歧桿菌組NF一KB表達(dá)表4TLR4、NF一沼免疫組化IOD值及相關(guān)性Bf組UC組TLR4NF一KB13.53士5.06*13.35士4.99.22.33士8.0420.50士7.85nUCUn乙O乙*F=30.237.F=23.832只0.01表5TLR4與NF一沼表達(dá)線性相關(guān)分析nf尸Bf組200.992(0.01UC組200.919<0.01
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2885213