目的:本研究旨在闡明同種異體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植對(duì)急性肝損傷大鼠肝功能和肝臟結(jié)構(gòu)改善情況,并探討干細(xì)胞是否通過Rho-ROCK信號(hào)通路影響肝臟修復(fù)過程中RhoA mRNA及其蛋白的表達(dá)變化,為進(jìn)一步研究骨髓MSCs修復(fù)急性肝損傷的作用機(jī)制提供依據(jù),并為臨床治療提供新的靶點(diǎn)。 方法:分離培養(yǎng)100g-120g健康幼齡雄性SD大鼠股骨MSCs并進(jìn)行細(xì)胞周期檢測(cè)及肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)誘導(dǎo)和糖原合成功能鑒定。將健康雌性180g-200g三月齡SD大鼠隨機(jī)分為3組:正常對(duì)照(N)組(n=10)、CCL4(C)組(n=10)及CCL4+MSCs(T)組(n=10)。N組不予任何處理;T組和C組腹腔注射0.1ml/100g 60%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCL4)花生油溶液制造急性肝損傷模型后24h,分別經(jīng)鼠尾靜脈移植MSCs和等量PBS。肝功能測(cè)定及病理組織學(xué)方法觀察移植前后大鼠肝功能及肝臟結(jié)構(gòu)改善情況。并行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reverse transcription- polymerase chain reaction,RT-PCR)及Western blotting分別檢測(cè)觀察區(qū)間內(nèi)RhoA mRNA和蛋白的表達(dá)變化。 結(jié)果: 1.大鼠骨髓MSCs 24h貼壁,原代7d可鋪滿90%以上的瓶底,傳代后3d-5d可鋪滿瓶底,傳至第4代仍保持高增殖性;流式細(xì)胞儀檢測(cè)平均80%的MSCs處于G0/G1期,少量MSCs處于活躍的增殖期;經(jīng)HGF誘導(dǎo)14d后MSCs具有糖原合成功能。 2.與C組相比,T組經(jīng)移植MSCs后能顯著改善CCL4急性損傷大鼠肝功能(1d時(shí),ALT 89.70±3.09 vs 147.59±6.83,P0.05;AST 263.67±17.05vs 472.68±19.04,P0.01;7d時(shí),ALT 42.38±14.31 vs 92.75±6.70,P0.05;AST 173.85±16.80 vs 260.41±25.35,P0.05),并迅速修復(fù)肝臟結(jié)構(gòu)。 3.N組大鼠肝臟的RhoA mRNA和蛋白表達(dá)量極低,C組經(jīng)CCL4損傷后,RhoA mRNA和蛋白的表達(dá)量迅速增加(1.39±0.046 vs 0.57±0.010,P0.01;1.23±0.020 vs 0.35±0.036,P0.01),此后表達(dá)量緩慢降低(7d時(shí),0.76±0.019 vs 0.57±0.011,P0.01;0.87±0.042 vs 0.34±0.018,P0.01)。T組經(jīng)MSCs移植后,與C組比較,RhoA mRNA和蛋白表達(dá)水平迅速下降(1d時(shí),1.08±0.012 vs 1.39±0.046,P0.01;1.08±0.017 vs 1.23±0.020,P0.01。7d時(shí),0.56±0.018 vs 0.76±0.019,P0.01;0.36±0.014 vs 0.87±0.042,P0.01)。 結(jié)論: 1.貼壁篩選法可以獲得較純化的MSCs,MSCs保持了較高的增殖潛能,并具有成體干細(xì)胞的特征,經(jīng)HGF誘導(dǎo)后可分化為具有肝細(xì)胞功能的肝樣細(xì)胞; 2.經(jīng)鼠尾靜脈移植MSCs后可以在一定程度上改善肝功能及修復(fù)受損的肝組織; 3.Rho-ROCK信號(hào)通路與急性肝損傷的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系,MSCs能通過抑制RhoA的活性,達(dá)到改善和修復(fù)肝損傷的作用。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R575
【部分圖文】：

SCs 的細(xì)胞周期 代 MSCs 中約有 80%處于 G0/G1期，G2期細(xì)胞約為 10.1.8%。圖 1-2 中橫坐標(biāo)表示熒光信號(hào)的相對(duì)強(qiáng)度，以道為為 G0/G1期，G0是 G1的早期階段，大約兩倍道（102-22兩者中間為 S 期；縱坐標(biāo)表示細(xì)胞數(shù)。大部分細(xì)胞處于少數(shù)細(xì)胞處于增殖活躍期，符合成體干細(xì)胞特征。

特異性的 RhoA 基因條帶，140 bp 處見造成大鼠肝損傷后 24 h，C 組 RhoA m±0.010）顯著上調(diào)（P < 0.01），此后T 組 RhoA mRNA 在 1d、3d 和 7d 等（表 2-1，圖 2-1），且 7d 時(shí)已恢復(fù)正表 2-1 大鼠肝臟組織 RTable2-1 Level of RhoA mRNA express1d 3d N 組 0.57±0.010 0.56±0.017 0.5C 組 1.39±0.046d1.06±0.024d0.7T 組 1.08±0.012bd0.93±0.020bd0.5bP<0.01vs C 組；dP<0.01vs N 組．M 1 2 3 4 5

白表達(dá)（1.23±0.020）較 N 組（0.35慢下降，至 14d 時(shí)才恢復(fù)正常水平。點(diǎn)較 C 組顯著下降（P < 0.01）（表 2表 2-2 大鼠肝臟組織 RhTable2-2 Level of RhoA protein express1d 3d N 組 0.35±0.036 0.34±0.022 0.34±C 組 1.23±0.020d1.09±0.050d0.87T 組 1.08±0.017bd0.88±0.016bd0.36bP<0.01vs C 組；dP<0.01vs N 組．1 2 3 4 5
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2877647