目的 觀察HCCR2基因穩(wěn)轉(zhuǎn)永生化人胃粘膜上皮細胞GES-1后其細胞的生物學(xué)變化;研究在永生化人胃粘膜上皮細胞GES-1和人胃癌細胞SGC-7901中,表皮生長因子EGF經(jīng)PI3K/Akt和MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)HCCR表達上調(diào)的分子機制。 方法 1、用脂質(zhì)體法分別將HCCR2-pcDNA3.1及空載體質(zhì)粒pcDNA3.1轉(zhuǎn)染永生化人胃粘膜上皮細胞GES-1,G418篩選,克隆環(huán)挑取細胞克隆,Western blot技術(shù)篩選陽性克隆,并檢測轉(zhuǎn)染細胞中HCCR蛋白水平,流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染細胞的細胞周期,MTT法檢測轉(zhuǎn)染細胞的增殖能力。 2、永生化人胃粘膜上皮細胞GES-1和人胃癌細胞SGC-7901分別以不同濃度EGF(0、25、50、100ng/ml)培養(yǎng)24h;EGF(100ng/ml濃度)培養(yǎng)不同時間(0、8、16、24h);用EGFR抑制劑PD153035分別處理GES-1、SGC-7901細胞1h后,再加入誘導(dǎo)劑EGF(100ng/ml濃度)誘導(dǎo)24h,用Western blot法檢測細胞中HCCR蛋白的表達變化。 3、用PI3K抑制劑LY294002分別處理GES-1、SGC-7901細胞1h后,再加入誘導(dǎo)劑EGF(100ng/ml濃度)誘導(dǎo),用Western blot法檢測細胞中HCCR蛋白的表達變化;用脂質(zhì)體法分別將活性型Akt(CA-Akt-pcDNA3.1)、缺陷型Akt(DN-Akt-pcDNA3.1)及空載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染GES-1和SGC-7901細胞,G418篩選,克隆環(huán)挑取細胞克隆,Western blot技術(shù)篩選陽性克隆,并檢測轉(zhuǎn)染細胞中Akt和HCCR蛋白水平,流式細胞儀檢測轉(zhuǎn)染細胞的細胞周期,MTT法檢測轉(zhuǎn)染細胞的增殖能力。 4、用MEK1抑制劑PD98059分別處理GES-1、SGC-7901細胞1h后,再加入誘導(dǎo)劑EGF(100ng/ml濃度)誘導(dǎo),用Western blot法檢測細胞中HCCR蛋白的表達變化。 結(jié)果 1、HCCR的過表達促進永生化人胃粘膜上皮細胞GES-1的增殖 HCCR2基因轉(zhuǎn)染細胞GES-1后,流式細胞法檢測轉(zhuǎn)染HCCR2組細胞細胞周期中S期較對照組(轉(zhuǎn)染空載體質(zhì)粒)延長,MTT法檢測轉(zhuǎn)染組細胞增值能力較對照組增強。 2、EGF誘導(dǎo)GES-1和SGC-7901中的HCCR的表達 GES-1細胞在無血清培養(yǎng)條件下,HCCR表達量很低,用EGF(50ng/ml)刺激24h后HCCR蛋白的表達升高,且隨劑量的增加而增加,用EGF(100ng/ml)刺激24h后HCCR的表達量明顯增加,提示EGF誘導(dǎo)GES-1細胞中HCCR的表達具有劑量和時間依賴性。用EGF刺激SGC-7901細胞后得到類似的結(jié)果。用EGFR抑制劑PD153035分別處理GES-1、SGC-7901細胞1h后,再加入誘導(dǎo)劑EGF誘導(dǎo)24h,HCCR的表達水平明顯降低。 3、EGF經(jīng)PI3K/Akt信號通路誘導(dǎo)HCCR的表達 用PI3K抑制劑LY294002分別處理GES-1、SGC-7901細胞1h后,再加入誘導(dǎo)劑EGF誘導(dǎo)24h,HCCR的表達水平明顯降低;活性型Akt(CA-Akt-pcDNA3.1)基因轉(zhuǎn)染GES-1細胞后,細胞中HCCR的表達上調(diào),流式細胞法和MTT法檢測轉(zhuǎn)染組細胞增值能力較對照組增強。缺陷型Akt(DN-Akt-pcDNA3.1)基因轉(zhuǎn)染SGC-7901細胞后,細胞中HCCR的表達下降,流式細胞法和MTT法檢測轉(zhuǎn)染組細胞增值能力較對照組減弱。 4、EGF經(jīng)MAPK信號通路誘導(dǎo)HCCR的表達 用MEK1抑制劑PD98059分別處理GES-1、SGC-7901細胞1h后,再加入誘導(dǎo)劑EGF誘導(dǎo)24h,HCCR的表達水平明顯降低。 結(jié)論 1、HCCR過表達能促進永生化人胃粘膜上皮細胞GES-1的增殖。 2、EGF能誘導(dǎo)永生化人胃粘膜上皮細胞GES-1和人胃癌細胞SGC-7901中HCCR表達增加,并具有時間、劑量依賴性。 3、EGF通過PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)HCCR的表達。 4、EGF通過MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路誘導(dǎo)HCCR的表達。 目的 評價根除幽門螺桿菌(Hp)治療對胃食管反流病相關(guān)癥狀的影響。 方法 在Pubmed,Embase數(shù)據(jù)庫中檢索2008年3月以前研究根除Hp與胃食管反流病關(guān)系的病例對照臨床研究,對這些文獻進行資料質(zhì)量評價,并對符合的文獻進行Meta-分析。 結(jié)果 1、14篇文獻(包括4662例患者)符合入選標準。 2、Hp根除對GERD患者燒心癥狀的影響 (1)隨訪6個月:根除組成功根除Hp后燒心癥狀改善(OR=1.95,95%CI 1.11-3.44,P＜0.05);安慰劑組無明顯變化(OR=1.51,95%CI0.83-2.75,P＞0.05)。 (2)隨訪1年:根除組成功根除Hp后燒心癥狀改善(OR=1.76,95%CI1.36-2.28,P＜0.0001);安慰劑組無明顯變化(OR=1.32,95%CI0.89-1.95,P＞0.05)。 (3)隨訪2年:根除組成功根除Hp后燒心癥狀無明顯變化(OR=1.64,95%CI 0.74-3.62,P＞0.05);安慰劑組改善(OR=2.10,95%CI1.77-2.69,P＜0.00001)。 3、Hp根除對GERD患者反酸癥狀的影響 (1)隨訪6個月:根除組成功根除Hp后反酸癥狀無明顯變化(OR=22.66,95%CI 0.15-3340.99,P＞0.05);安慰劑組無明顯變化(OR=19.97,95%CI 0.04-11156.34,P＞0.05)。 (2)隨訪1年:根除組成功根除Hp后反酸癥狀改善(OR=3.51,95%CI1.54-8.02,P＜0.0001);安慰劑組無明顯變化(OR=2.23,95%CI0.82-6.07,P＞0.05)。 (3)隨訪2年:根除組成功根除Hp后反酸癥狀無明顯變化(OR=1.94,95%CI0.61-6.22,P＞0.05);安慰劑組改善(OR=2.99,95%CI 2.39-3.74,P＜0.00001)。 4、Hp根除對GERD患者反流性食管炎的影響 (1)隨訪6個月:根除組成功根除Hp后反流性食管炎與根除前無明顯變化(OR=0.09,95%CI 0.42-1.09,P＞0.05);安慰劑組無明顯變化(OR=1.10,95%CI 0.51-2.37,P＞0.05)。 (2)隨訪1年:根除組成功根除Hp后反流性食管炎與根除前無明顯變化(OR=1.2,95%CI0.33-4.39,P＞0.05);安慰劑組無明顯變化(OR=1.30,95%CI0.59-3.20,P＞0.05)。 結(jié)論 1、成功根除Hp6個月、1年、2年后,在排除PPI的作用后,GERD患者燒心、反酸、反流性食管炎的發(fā)生率與根除之前比未發(fā)現(xiàn)有加重的情況。 2、GERD患者燒心癥狀在6個月和1年、反酸癥狀在1年成功根除Hp后癥狀有所改善。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R735.2;R571
【部分圖文】：

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BEGF誘導(dǎo)SGC一7901細胞中A火t和HCCR的表達
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 柯楊;寧濤;高燕;李吉友;王明生;鄂征;;人胃粘膜上皮細胞原代培養(yǎng)及其生物學(xué)鑒定[J];解剖學(xué)報;1992年04期

2 王冰,蘇秀蘭,寧濤,馮莉雅,路桂榮,柯楊;MNNG誘導(dǎo)人胃粘膜上皮細胞系GES-1及正常胃粘膜標本原癌基因的激活[J];中華腫瘤雜志;1996年01期

本文編號：2877615