目的：經(jīng)脾臟移植BMP-4誘導(dǎo)分化的肝干細(xì)胞,探討其對四氯化碳所致的SD大鼠急性肝功能衰竭的治療作用。 方法：建立SD大鼠肝干細(xì)胞增殖模型,分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增大鼠肝干細(xì)胞,即肝卵圓細(xì)胞(hepatic oval cell, HOC);構(gòu)建攜帶GFP的大鼠BMP-4腺病毒載體,并轉(zhuǎn)染原代大鼠肝干細(xì)胞。以免疫熒光染色檢測不同細(xì)胞分子標(biāo)記物的表達(dá),鑒定原代HOC和BMP-4誘導(dǎo)分化后的細(xì)胞表型。以腹腔注射四氯化碳建立大鼠急性肝衰竭模型,造模后24h將4×107/ml細(xì)胞懸液經(jīng)大鼠脾臟異體移植。細(xì)胞移植術(shù)后記錄SD大鼠生存率,分別于術(shù)后第2d、5d和7d,尾靜脈取血送肝功能檢測,獲取大鼠肝組織標(biāo)本行HE染色及免疫熒光檢測。 結(jié)果：分離所得的大鼠原代HOC表達(dá)OV6,不表達(dá)Alb和CK19；腺病毒轉(zhuǎn)染HOC 24h后,表達(dá)熒光蛋白GFP,轉(zhuǎn)染Ad-BMP-4后18d的HOC表達(dá)肝細(xì)胞標(biāo)志Alb；實(shí)驗(yàn)組大鼠的生存率、肝功能及肝臟損傷修復(fù)明顯優(yōu)于對照組(p0.05)。組織免疫熒光染色結(jié)果顯示,實(shí)驗(yàn)組GFP陽性細(xì)胞較對照組細(xì)胞的增殖明顯。 結(jié)論：BMP-4可體外誘導(dǎo)大鼠原代HOC向肝細(xì)胞定向分化；經(jīng)脾臟異體移植以BMP4誘導(dǎo)分化的HOC,可明顯改善CCl4所致SD大鼠急性肝衰竭。
【學(xué)位單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2011
【中圖分類】：R575.3
【部分圖文】：

1BMP一4mRNA在Ad一BMP4一HOC中的過BMP一4mRNA的表達(dá)量較空病毒對照組MOz10及MOI為5時BMP一4mRNA的表達(dá)量較空病毒對照組RNA的表達(dá)量與未轉(zhuǎn)染組無差別。ionlevelofBMp一4mRNAintransfeetedeellswa一raseehainreaetion.lofBMP一4mRNAinAd一BMP一4grouPwithMOIolgrouPs.TheexPressionlevelofBMP一4mRNAinAanad一eontrolgrouPwithMOI5.TherewasnodiffereneeetedgrouP.

移杭術(shù)后第2人，取SD大鼠脾臟做冰凍切片，熒光顯微鏡卜發(fā)現(xiàn)，Ad一BMP一4一HOC不日Ad一HOC全目脾均主內(nèi)均有GFP陽性細(xì)胞存在。GFP陽乍仁細(xì)胞逐漸向四周遷移。見圖5。圖5脾臟內(nèi)GFP陽性細(xì)胞觀察a，b:分另.J為Ad一HOC組和Ad一BMP一4一HOC組GFP陽性細(xì)胞;c，d:分別為Ad一HOC組和Ad一BMP一4一HOC組白光下圖片。l了 igure5.GFPPositiveeellswerefoundinsPleens. Panel(a.b):lotsofGFPPosit丫 eeellswerefoundinsPlee一 15ofAd一「{OC乏 IndAd一BMP一4一I一IOCgrouP.Panel(e， d):ThePllasesofaandb. 3.6BMP一4誘導(dǎo)分化的HOC移植組肝損傷修復(fù)明顯優(yōu)于對照組!川勝丫叫專切少}HE染色，丁以觀察川一組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，移杭術(shù)后第5人，各組均，JJ見j]l一細(xì)胞大川‘狀壞死，壞死f}小葉中央靜脈開始
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本文編號：2877445