研究目的:本研究采用阻塞性黃疸(OJ)肝損傷KM小鼠為實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象,觀察有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)OJ肝損傷小鼠干預(yù)作用以及miRNA介導(dǎo)Wnt通路相關(guān)因子在肝和血液組織差異表達(dá)的比較分析。研究方法:采用本課題組構(gòu)建的一種新的膽總管懸掛OJ肝損傷小鼠模型,40只雄性KM小鼠隨機(jī)分為4組:假手術(shù)組(SO)、模型組(M)、有氧運(yùn)動(dòng)組(TM)、水飛薊賓組(SFJB)。其中除假手術(shù)組、假手術(shù)對(duì)照組外都以總膽管懸掛至腹壁48小時(shí)構(gòu)建OJ小鼠模型。水飛薊賓組于膽總管結(jié)扎術(shù)后約3天進(jìn)行水飛薊賓灌胃,每天固定在下午4點(diǎn)至6點(diǎn),劑量為0.4ml/次,共6周。中等強(qiáng)度有氧運(yùn)動(dòng)組小鼠訓(xùn)練坡度為0%,無(wú)負(fù)重,速度12m/min(75%VO_2max),每天固定訓(xùn)練60min,每周6天,共6周。干預(yù)結(jié)束后,取材前一晚小鼠禁食過(guò)夜,稱重,麻醉完全后收集血液,處死動(dòng)物分離肝組織。采用血生化檢測(cè)血清中總膽紅素(TBIL)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和清門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)的水平;HE染色對(duì)比小鼠肝臟組織形態(tài)及結(jié)構(gòu)的病理改變;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)肝臟組織wnt1、β-catenin、cyclinD1、HGF的表達(dá)以及Ki67細(xì)胞計(jì)數(shù);熒光定量PCR檢測(cè)血液和肝組織中wnt1、LRP5、β-catenin、cyclinD1、HGF的表達(dá)。研究結(jié)果:(1)HE染色顯示:SO組小鼠肝細(xì)胞索呈放射狀排列;M組小鼠的肝細(xì)胞發(fā)生萎縮,肝索斷裂,核固縮等,間質(zhì)可見(jiàn)紅細(xì)胞堆積;SFJB組、TM運(yùn)動(dòng)組肝小葉完整,肝索排列整齊,無(wú)形變及壞死現(xiàn)象。(2)M組中TBIL、ALT、AST含量最高,TM組、SFJB組含量最低(P0.01);(3)qRT-PCR結(jié)果顯示:與M組比較,SFJB組,TM組wnt1、LRP5、β-catenin、cyclinD1、HGF mRNA表達(dá)水平顯著增加(P0.05,P0.01);miRNA結(jié)果顯示,與M組比較,TM組、SFJB組的miR-34a水平顯著下調(diào),具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(4)免疫組織化學(xué)法結(jié)果顯示:wnt1、β-catenin、cyclinD1、HGF在SO組中低表達(dá),SO組β-catenin、cyclinD1為陰性表達(dá);與M組比較,TM組、SFJB組wnt1、β-catenin、cyclinD1、HGF表達(dá)增高(P0.01)。與M組比較,TM組、SFJB組Ki67陽(yáng)性表達(dá)率明顯增加,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。結(jié)論:中等強(qiáng)度有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)OJ小鼠引發(fā)的肝損傷有明顯緩解作用,能不同程度促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù),其抗損傷作用與SFJB組作用相近。其作用機(jī)制與運(yùn)動(dòng)通過(guò)miR-34a介導(dǎo)激活Wnt信號(hào)通路發(fā)揮著關(guān)鍵性的作用有關(guān)。Wnt通路中的相關(guān)因子wnt1、β-catenin、和HGF在血漿中的表達(dá)水平作為一種無(wú)創(chuàng)的、簡(jiǎn)單易行的檢測(cè)手段,為肝臟疾病的診斷及發(fā)生發(fā)展過(guò)程中標(biāo)志物的篩選具有良好的應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位單位】：湖南師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R575
【部分圖文】：

基于 miR-34a 調(diào)控 wnt 通路探討有氧運(yùn)動(dòng)抗 OJ 小鼠肝損傷研究4）及 LGR5 結(jié)合，通過(guò)增強(qiáng) Wnt 信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而增加 LRP6 的 Wnt 依賴性[17,18]。R-spondin 配體也通過(guò)跨膜 E3 泛素連接酶鋅、ZNRF3 以及它的同源，增強(qiáng) Wnt 信號(hào)傳導(dǎo)。其中泛素化 Frizzled 和 LRP6 將它們靶向蛋白酶降解蛋白在血漿膜上的募集破壞了破壞復(fù)合體，促進(jìn)了β-catenin 的穩(wěn)定化和細(xì)積。非磷酸化的β-catenin 轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，通過(guò)與 LCF/LEF 結(jié)合形成復(fù)合體下游靶基因的轉(zhuǎn)錄過(guò)程。Wnt 信號(hào)通路在細(xì)胞之間的信號(hào)傳導(dǎo)作用，對(duì)肝增殖、分化以及再生、修復(fù)有著重要的影響[20]。

圖 2-1 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線圖2.4.2 模型的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組2.4.2.1 動(dòng)物造模擬采用成年健康雄性昆明種（KM）小鼠，54-56 日齡，體重 23g-25g，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后，參照膽總管結(jié)扎方法[25]并改進(jìn)，手術(shù)前禁食，腹腔注射 1%戊巴比妥鈉（500mg/kg 體重）進(jìn)行麻醉，消毒，仰臥位固定于手術(shù)板，小鼠腹部劍突下 4毫米處備皮，用棉簽蘸取少許碘伏涂抹在備皮部位消毒，鑷子輕輕夾起備皮皮膚，縱向剪開(kāi)長(zhǎng)約 1-1.5cm 的切口，露出肝臟。用玻璃分針撥動(dòng)肝臟找出膽總管，用4-0 不可吸收手術(shù)線將膽總管懸掛于腹壁，關(guān)好腹腔后膽管成 90°彎曲，縫合手術(shù)傷口。2.4.2.2 實(shí)驗(yàn)分組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康雄性 KM 小鼠 40 只，隨機(jī)分為 4 個(gè)組。

嗜睡。手術(shù)24h之后，模型組小鼠的尿液顏色逐步變黃。48h之后模型組小鼠皮膚、毛發(fā)、耳尖等部位出現(xiàn)局部發(fā)黃，待第七天隨機(jī)抽取10只小鼠進(jìn)行剖腹檢查，發(fā)現(xiàn)結(jié)扎近端膽總管囊性擴(kuò)張加重，肝臟腫大呈淤膽性改變。由此，我們推斷出造模成功，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)之后，TM組小鼠癥狀輕于M組。3.2 血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)表 3-1，圖 3-1 顯示：相比 M 組，SO 組、TM 組、SFJB 組 TBIL、ALT、AST含量均有不同程度的下降（P<0.05，P<0.01），SFJB 組含量最低（P<0.01）其次為 TM 組（P<0.01）。表 3-1 小鼠血清 TBIL、ALT、AST 含量比較 ( ±S)注：與假手術(shù)組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較#P＜0.05,##P＜0.01組別 n TBIL ALT ASTM 10 29.03±1.97**43.03±1.52**38.01±2.26**TM 10 18.25±0.87**##25.12±2.33**##25.43±1.17**##SFJBSO101016.23±0.87**##8.76±0.38##19.03±1.77**##7.78±0.64##20.41±1.12**##7.46±0.54##
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李建華;周學(xué)榮;陳汝偉;翟秀云;馮濤;徐玲;吳淑華;李建民;;Wnt通路在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和神經(jīng)系統(tǒng)疾病過(guò)程中的作用研究[J];系統(tǒng)醫(yī)學(xué);2019年14期

2 郭武城;程潔莉;楊征毅;張憶;何恩亮;錢鈞;宋晶晶;孫晉;袁林;;賴氨酸乙�；D(zhuǎn)移酶2A通過(guò)經(jīng)典Wnt通路影響牙周膜干細(xì)胞成骨分化[J];華西口腔醫(yī)學(xué)雜志;2018年01期

3 趙帥;邵元慧;連方;;補(bǔ)腎滋陰法對(duì)卵巢顆粒細(xì)胞Wnt通路的影響[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2018年12期

4 李煒玉;黃圓圓;江志敏;謝德榮;畢卓菲;楊瓊;;Wnt通路激活的結(jié)直腸癌細(xì)胞抑制腫瘤浸潤(rùn)性樹(shù)突細(xì)胞成熟的機(jī)制研究[J];嶺南現(xiàn)代臨床外科;2019年02期

5 李淑云;張翠萍;付小兵;新燕;;Wnt信號(hào)通路在表皮干細(xì)胞增殖分化過(guò)程中的調(diào)控作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2007年07期

6 李艷萍;楊文雪;夏啟勝;閻小萍;陶慶文;陳志華;趙淑欣;孔維萍;;補(bǔ)腎強(qiáng)督方對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨過(guò)程Wnt通路中因子表達(dá)的影響[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào);2019年02期

7 陳鵬;姚宏波;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞通過(guò)激活Wnt通路防治阿爾茨海默病[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2019年15期

8 陳磊;姬瑞娟;鄧子軍;張喜;張傳森;李玉泉;楊向群;;阻斷經(jīng)典Wnt通路對(duì)棕色脂肪干細(xì)胞向起搏樣細(xì)胞分化的作用[J];解剖學(xué)雜志;2015年02期

9 李平芳;石曉燕;周藤;;白藜蘆醇通過(guò)抑制Wnt通路對(duì)人卵巢癌細(xì)胞增殖、遷移影響的機(jī)制研究[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2019年19期

10 鄢志雄;汪洋;郭勇;;微小RNA經(jīng)Wnt通路調(diào)控成骨分化及其力學(xué)響應(yīng)的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2018年06期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 趙園園;Wnt通路上調(diào)HMGB1誘導(dǎo)食管鱗癌放射抵抗及機(jī)制研究[D];南京大學(xué);2018年

2 李剛;P75NTR激活Wnt通路促進(jìn)外胚間充質(zhì)干細(xì)胞礦化的調(diào)控機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2017年

3 臘蕾;Wnt通路抑制劑FrpHE和DKK-1在腫瘤細(xì)胞中的誘導(dǎo)表達(dá)[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

4 孫太振;地黃管食通口服液對(duì)食管癌細(xì)胞凋亡及Wnt通路β-catenin和c-myc的影響[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2006年

5 楊吉龍;韌帶樣型纖維瘤病中8號(hào)染色體異常及Wnt通路中APC和β-catenin基因突變的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

6 周華蓉;Wnt通路抑制基因表觀遺傳學(xué)變化與急性白血病的關(guān)系及Genistein對(duì)Wnt通路抑制基因組蛋白修飾的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

7 史江峰;升降散治療血管性癡呆的臨床及實(shí)驗(yàn)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

8 符德元;乳腺癌相關(guān)基因異常甲基化的臨床實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 印衛(wèi)鋒;降鈣素基因相關(guān)肽誘導(dǎo)前軟骨干細(xì)胞增殖和成骨分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];華中科技大學(xué);2016年

10 王紅巖;體節(jié)發(fā)生相關(guān)通路的系統(tǒng)生物學(xué)建模研究[D];東北師范大學(xué);2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 彭琪;基于miR-34a調(diào)控Wnt通路探討有氧運(yùn)動(dòng)抗OJ小鼠肝損傷研究[D];湖南師范大學(xué);2019年

2 周璇;IP6對(duì)卵巢癌SKOV3細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力及Wnt通路的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2017年

3 杜婷婷;增齡因素影響下牙周膜干細(xì)胞生物學(xué)行為變化及Wnt通路對(duì)其調(diào)控機(jī)制的研究[D];中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2017年

4 詹倩娜;LSD1介導(dǎo)Wnt通路促進(jìn)胃癌細(xì)胞侵襲、遷移和EMT的機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2017年

5 姜?dú)g歡;長(zhǎng)鏈非編碼RNA-ROR通過(guò)Wnt通路誘導(dǎo)高級(jí)別卵巢癌EMT特性的機(jī)制研究[D];青島大學(xué);2017年

6 陳飛宇;扶正化瘀解毒方有效成分樺木酸對(duì)肝癌細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

7 李麗;經(jīng)典Wnt信號(hào)通路在結(jié)直腸無(wú)蒂鋸齒狀腺瘤中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2012年

8 夏雷;以TCF為抗癌化合物靶標(biāo)的分子機(jī)制研究[D];貴州大學(xué);2016年

9 張科;PKD1基因?qū)w外培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移影響的分子機(jī)制研究[D];四川大學(xué);2007年

10 趙萌;miR-205對(duì)PEG3在子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞系中的靶向降調(diào)節(jié)作用[D];山東大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2875470