第一章潰瘍性結(jié)腸炎患者糞便中11種乳桿菌的分析 目的：根據(jù)DNA序列信息,利用16S～23S DNA基因區(qū)域中不同種乳桿菌的序列特異性,對11種潰瘍性結(jié)腸炎患者糞便中的乳桿菌種進行組成和數(shù)量的研究。 方法：選取符合入選標準的45例患者為觀察組,45例健康人為對照組。研究標本為入選及對照組人的糞便。用選擇性培養(yǎng)的方法檢測8組細菌的變化。用已有確定的11種乳桿菌種特異性引物,從糞便細菌DNA中擴增出相應種的乳桿菌序列,電泳檢測PCR產(chǎn)物,用以確定乳桿菌種的分布,用Real-Time PCR相對定量檢測糞便菌群中乳桿菌種的含量。 結(jié)果：潰瘍性結(jié)腸炎患者糞便中以雙歧桿菌、大腸桿菌、金葡菌和腸球菌的數(shù)量為多,擬桿菌和酵母菌數(shù)量較少。與對照組比較,乳桿菌數(shù)量減少而腸球菌數(shù)量增多。酵母菌、擬桿菌、雙歧桿菌、大腸桿菌、金葡菌以及需氧菌總數(shù)與對照組接近。11種乳桿菌的檢出結(jié)果表明,患者組檢出率減少有4種：L. crispatus, L. fermentum, L gasseri, L. salivarius。檢出率增多有2種：L. delbrueckii, L. paracasei。與正常人接近的有5種：L. gallinarum, L. acidophilus, L. casei, L plantarum, L. reuteri。相對定量檢測結(jié)果顯示,患者組糞便菌群中,L. crispatus, L. delbrueckii, L. reuteri及E. faecalis含量較對照組有所增加,而L. gallinarum, L. fermentum, L.johnsonii, L. salivarius, L. acidophilus, L. casei, L. paracasei, L. plantarum以及乳桿菌總量較對照組減少。 結(jié)論：在可培養(yǎng)細菌中,潰瘍性結(jié)腸炎患者糞便中乳桿菌顯著減少,而腸球菌明顯增多。在種的水平分析11種乳桿菌,患者糞便中乳桿菌的組成與正常人不同。相對定量分析發(fā)現(xiàn)患者糞便中3種乳桿菌及糞腸球菌含量增加,其余8種乳桿菌的量及乳桿菌屬的量減少。 第二章三種乳桿菌和糞腸球菌治療實驗性結(jié)腸炎的療效觀察 目的：根據(jù)潰瘍性結(jié)腸炎患者糞便菌群中乳桿菌量的變化選擇相應種的乳桿菌株進行治療實驗性結(jié)腸炎的效果驗證,從而確立某種或幾種乳桿菌與該疾病的關(guān)系,以期發(fā)現(xiàn)有意義的乳桿菌株。 方法：選用雌性SPF級Bal b/c小鼠為對象,自由飲用DSS誘導成結(jié)腸炎小鼠模型為研究載體,采用分組對照的方法比較效果。以經(jīng)人類糞便分析發(fā)現(xiàn)有差異的乳桿菌株及糞腸球菌為治療觀察菌,美沙拉嗪為陽性對照劑。試驗期間觀察記錄小鼠存活率、生長狀態(tài)、大便性狀以及隱血、體重、結(jié)腸長度、DAI積分以及病理積分。 結(jié)果：發(fā)酵乳桿菌有阻止實驗性結(jié)腸炎小鼠死亡的趨勢,減輕小鼠體重下降,效果優(yōu)于陽性對照藥、植物乳桿菌及糞腸球菌,并可阻止結(jié)腸縮短,減輕小鼠疾病活動程度,無論在炎癥損傷或隱窩損傷方面均對實驗性結(jié)腸炎組織學評分有一定改善作用,可部分緩解DSS所致的結(jié)腸粘膜損傷。卷曲乳桿菌似有減少小鼠存活率的趨勢,并加速小鼠體重下降,雖未加重結(jié)腸縮短,但在一定程度上加重小鼠結(jié)腸的炎癥損傷。植物乳桿菌與糞腸球菌對小鼠結(jié)腸炎癥無明顯治療或加重作用,且糞腸球菌可以一定程度的減輕小鼠結(jié)腸粘膜的隱窩損傷。 結(jié)論：經(jīng)檢測體重變化、結(jié)腸長度改變、DAI積分和病理學積分等變量,綜合評價結(jié)論為：發(fā)酵乳桿菌具有明顯治療DSS誘導的小鼠結(jié)腸炎的作用,效果接近美沙拉嗪。 第三章發(fā)酵乳桿菌微生物學特征的研究 目的：對經(jīng)體內(nèi)實驗驗證的對實驗性結(jié)腸炎有治療作用的發(fā)酵乳桿菌株進行微生物學研究,以確定其大部分的微生物學特征。 方法：研究對象為發(fā)酵乳桿菌菌株CCTCC M206120,用光鏡和電鏡對其形態(tài)學進行分析,以氧的耐受性分析其生長特性,模擬胃和小腸環(huán)境觀察其耐酸以及耐膽汁特性,并進行藥敏試驗了解其對抗生素的敏感譜,用G+C比例以及16S DNA序列進行分析了解其遺傳學特性。 結(jié)果：本研究結(jié)果顯示該株發(fā)酵乳桿菌為革蘭氏陽性桿菌,在有氧環(huán)境中生長較差,在厭氧環(huán)境下生長最好。對酸和膽汁有一定耐受性。對33種抗生素高度敏感,其生化及遺傳學特征均符合發(fā)酵乳桿菌。 結(jié)論：初步明確了發(fā)酵乳桿菌菌株CCTCC M206120的一些微生物學特征。
【學位單位】：中南大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2012
【中圖分類】：R574.62
【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞
第一章 潰瘍性結(jié)腸炎患者糞便中11種乳桿菌的分析
    前言
    材料與方法
    實驗結(jié)果
    討論
    小結(jié)
第二章 三種乳桿菌和烘腸球菌治療實驗性結(jié)腸炎的療效觀察
    前言
    材料與方法
    實驗結(jié)果
    討論
    小結(jié)
第三章 發(fā)酵乳桿菌微生物學特征的研究
    前言
    材料與方法
    實驗結(jié)果
    討論
    小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
攻讀學位期間發(fā)表論文和所獲獎勵

【參考文獻】

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1 歐陽欽,潘國宗,溫忠慧,萬學紅,胡仁偉,林三仁,胡品津;對炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的建議[J];中華消化雜志;2001年04期

本文編號：2874516