發(fā)布時(shí)間：2020-11-07 11:38

　　 目的:人食管下括約肌(LES)是位于食管胃連接部特殊增厚的環(huán)形肌,其寬度約2-3cm。Liebermann-Meffert等首次提出人LES由位于胃小彎側(cè)呈半環(huán)形的鉤狀纖維(clasp fibres)和位于大彎側(cè)呈斜行分布的套索纖維(sling fibres)共同構(gòu)成,這兩束肌纖維與膈腳一起在食管胃結(jié)合部形成高壓帶,維持LES的關(guān)閉狀態(tài),使LES形成一種類似單向閥門的結(jié)構(gòu)。正常狀態(tài)下,由于LES的持續(xù)性收縮使胃內(nèi)容物不能反流入食管,另一方面,由于LES的適時(shí)舒張?jiān)试S了食物繼續(xù)下行入胃,或嘔吐和打嗝,使胃內(nèi)的液體或氣體反流如食管并經(jīng)口腔排出。LES的收縮和舒張功能調(diào)節(jié)機(jī)制非常復(fù)雜,包括了神經(jīng)系統(tǒng)、體液因素及自身肌源性等多種因素。多巴胺(DA)受體作為G蛋白偶聯(lián)受體家族重要的受體類型之一,廣泛存在于哺乳動(dòng)物的中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng),并發(fā)揮著重要的作用。到目前為止已經(jīng)發(fā)現(xiàn)它有D1R-D5R五種亞型,通過對(duì)腺苷酸活化酶活性的調(diào)節(jié),可以實(shí)現(xiàn)不同部位平滑肌的收縮與舒張。按照其亞型對(duì)腺苷酸活化酶活性的不同作用,又將DA受體分為兩大類即D1樣受體(D1R、D5R)和D2樣受體(D2R、D3R、D4R)。D1樣受體激活腺苷酸活化酶活性,而D2樣受體降低激活腺苷酸活化酶活性。但目前國內(nèi)外對(duì)人LES受體類型及其分型以及調(diào)節(jié)機(jī)制的研究,主要局限于膽堿能受體,對(duì)于DA受體的研究則相對(duì)甚少�，F(xiàn)有的對(duì)食管粘膜DA受體的研究也 主要是針對(duì)動(dòng)物(負(fù)鼠等),與人有著種屬,生理學(xué)的差異,對(duì)于人LES的DA受體的表達(dá)規(guī)律及調(diào)節(jié)機(jī)制的相關(guān)研究則未見報(bào)告。本試驗(yàn)采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白印跡法(Western-blot)研究人LES的DA受體的5種亞型在套索纖維、鉤狀纖維、食管環(huán)行肌和胃底環(huán)行肌中mRNA、受體蛋白的表達(dá)規(guī)律,為進(jìn)一步研究DA受體在人LES調(diào)節(jié)機(jī)制中的作用奠定基礎(chǔ),從而更為完善的闡述人LES調(diào)節(jié)機(jī)制,為食管運(yùn)動(dòng)功能障礙性疾病的臨床治療提供理論依據(jù)。 方法: 1選取2007年12月到2008年10月在我院因高位食管中段癌行食管大部切除術(shù)患者30例,其中男性23例,女性7例。手術(shù)室采集新鮮食管胃連接部手術(shù)標(biāo)本,銳性剝?nèi)ノ纲S門部及食管下段的粘膜層及粘膜下層后,制備套索纖維(S)、鉤狀纖維(C)、食管體部環(huán)行肌(E)和胃底環(huán)行肌(G)的肌條; 2按照1ml Trizol/100mg標(biāo)本的比例加入Trizol,4℃條件下用組織勻漿器加充分研磨組織,然后依次通過氯仿萃取,異丙醇沉淀和75%乙醇的洗滌作用最終制備出組織RNA。DEPC水溶解,經(jīng)紫外分光光度計(jì)和1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定其純度和完整性之后,應(yīng)用5種DA受體亞型的引物行RT-PCR,檢測其mRNA在4種肌條的表達(dá),經(jīng)Gel Pro軟件分析擴(kuò)增產(chǎn)物的光密度值(IOD),并計(jì)算DA受體亞型與β-actin IOD的比值表示mRNA的相對(duì)含量; 3按照100ul TBS /10mg標(biāo)本的比例加入TBS, 4℃條件下用組織勻漿器加入TBS液勻漿,勻漿液(4℃,1000×g)離心10分鐘。棄上清后,以美國PIERCE公司的膜蛋白提取試劑盒制備膜受體蛋白,考馬斯亮藍(lán)G-250定量,調(diào)整蛋白至相同濃度后,應(yīng)用電泳儀電泳,分離出與5種DA受體亞型的分子量大小相應(yīng)的蛋白后轉(zhuǎn)膜,最后應(yīng)用DA受體亞型抗體行Western blot檢測蛋白的表達(dá),并分析IOD值。 結(jié)果: 1 RT-PCR經(jīng)紫外分光度計(jì)測定,提取的總RNA A260/A280的值是1.8-1.9;1%瓊脂糖凝膠電泳顯示,28S帶的寬度及亮度是18S帶的兩倍。內(nèi)參照β-actin在838bp處亮度均勻,在各反應(yīng)中,擴(kuò)增結(jié)果基本一致。有3種DA受體亞型mRNA在各肌條中均有表達(dá),分別是D1R,D2R,D5R,擴(kuò)增產(chǎn)物的長度與預(yù)計(jì)的一致,分別為455、279、363bp。相同肌條不同DA受體亞型與β-actin IOD比值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=5741.75,p=0.00),兩兩比較3種受體亞型mRNA表達(dá)從強(qiáng)到弱順序依次為D_1R,D_5R,D_2R,相同的受體亞型不同的肌條間mRNA的表達(dá)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。另外兩種受體亞型D_3R,D_4R的mRNA在四種肌條中均無表達(dá)。 2 Western blot3種DA受體亞型有其相應(yīng)蛋白條帶的表達(dá),分別是D_1R,D_2R,D_5R,分子量分別為51、51、53。相同肌條不同受體亞型蛋白表達(dá)的IOD值有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=8453.308,p=0.00),兩兩比較3種受體亞型蛋白表達(dá)從強(qiáng)到弱的順序?yàn)镈_1R,D_5R,D_2R。相同受體在個(gè)肌條間沒有蛋白表達(dá)的差異另外兩種受體亞型D_3R,D_4R的蛋白在四種肌條中均無表達(dá)。 結(jié)論: 1有3種DA受體亞型mRNA在各肌條有表達(dá),分別是D_1R,D_2R,D_5R,其中D1R表達(dá)量最高,其它依次是D_5R,D_2R;相同受體在各肌條間mRNA的表達(dá)無差異;D3R,D_4R的mRNA在四種肌條中均無表達(dá); 2有3種DA受體亞型有其相應(yīng)蛋白條帶的表達(dá),D_1R表達(dá)量最高,其它依次是D_5R,D_2R;相同受體在各肌條間蛋白的表達(dá)無差異;D_3R、D_4R的蛋白在四種肌條中均無表達(dá)。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R571
【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
研究論文 人食管下括約肌多巴胺受體的表達(dá)規(guī)律
    前言
    材料與方法
    結(jié)果
    附圖
    附表
    討論
    結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
綜述 消化道多巴胺受體的亞型分布及其功能
    參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡歷

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 高立平;劉俊峰;溫士旺;;胃泌素和胃動(dòng)素對(duì)人離體食管下括約肌張力的調(diào)節(jié)機(jī)制[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2006年03期

2 周俊,段麗萍,葉嗣懋,韓亞京,白若韻,林三仁;多巴胺受體亞型D_4和D_5在人胃、十二指腸的定位及表達(dá)[J];中華消化雜志;2003年07期

3 高立平;劉俊峰;溫士旺;田子強(qiáng);季保慶;王其彰;;膽囊收縮素受體對(duì)人食管下括約肌套索纖維和鉤狀纖維的調(diào)節(jié)機(jī)制[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2006年04期

4 溫士旺;劉俊峰;高立平;田子強(qiáng);王其彰;李保慶;;一氧化氮介導(dǎo)人食管下括約肌舒張的作用機(jī)制[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2006年01期

本文編號(hào)：2873893