目的 通過(guò)檢測(cè)自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis, AIH)患者的外周血T淋巴細(xì)胞亞群、B淋巴細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞表達(dá),分析其與肝功能、免疫球蛋白和肝臟炎癥活動(dòng)指數(shù)(Hepatitis activity index, HAI)的相關(guān)性,了解淋巴細(xì)胞亞群在AIH發(fā)病中的作用機(jī)制,為AIH的診治提供依據(jù)。對(duì)接受骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)移植治療的AIH模型小鼠肝組織內(nèi)CD3+細(xì)胞、干擾素-γ(Interferon-y, IFN-γ)、程序性死亡分子1(Programmed death-1,PD-1)、程序性死亡配體-1(Programmed death ligand-1, PD-L1)表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),初步探討MSCs通過(guò)PD-1通路免疫調(diào)控治療AIH的機(jī)制。 方法 1、選擇確診為AIH且未接受激素及免疫抑制劑治療的患者20例,為AIH組,以20例健康成年人為對(duì)照組。兩組分別進(jìn)行肝功能指標(biāo)(血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、γ-谷胺酰轉(zhuǎn)移酶(y-glutamyltransferase,y-GT))、血清總膽紅素(Total bilirubin,TBIL)、直接膽紅素(Direct bilirubin,DBIL);免疫球蛋白(免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM)、免疫球蛋白A(immunoglobulin A, IgA))的檢測(cè)；AIH組行肝穿刺活組織病理檢查,評(píng)價(jià)肝炎活動(dòng)性指數(shù)HAI。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)兩組外周血T、B淋巴細(xì)胞亞群表面標(biāo)志的表達(dá)情況,并將淋巴細(xì)胞亞群比率與肝功能指標(biāo)、免疫球蛋白及HAI評(píng)分進(jìn)行相關(guān)性分析。 2、以AIH模型小鼠接受MSCs移植治療,分為MSCs治療組、PBS對(duì)照治療組和正常對(duì)照組,三組分別于造模時(shí)、治療后1周、4周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)取鼠肝組織。三組小鼠不同時(shí)間點(diǎn)肝組織樣本數(shù)均為10個(gè)。用免疫組化方法檢測(cè)各組小鼠各時(shí)間點(diǎn)肝組織內(nèi)CD3+、IFN-γ、PD-1和PD-L1的表達(dá)情況。 結(jié)果 1.AIH患者外周血淋巴細(xì)胞亞群異常改變與肝功能、免疫球蛋白和肝炎活動(dòng)指數(shù)的關(guān)系 1.1AIH組外周血CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B、CD5+CD19+B細(xì)胞百分比及CD5+CD19+B/CD19+B細(xì)胞比值分別為46.00±16.84%、34.26±11.60%、13.6±5.55%、8.45±6.09%、0.62土0.15,均明顯高于對(duì)照組的35.50±3.59%、25.21±2.89%、9.85±1.21%、2.84±0.92%、0.29±0.10,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。AIH組CD3+T細(xì)胞百分比、CD4+CD25+CD127dim T細(xì)胞百分比和CD3+CD4+T/CD3+CD8+T細(xì)胞比值分別為64.23±13.24%、5.59±2.17%、1.30±±0.25,而對(duì)照組為69.38±4.32%、6.09±1.36%、1.42±0.19,兩組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 1.2AIH組ALT、AST、ALP、γ-GT、TBIL、DBIL分別為197.00±183.915U/L188.65±180.00U/L、189.30±38.10U/L、148.00±39.61U/L、87.88±114.88μmol/L、59.97±83.91μmol/L;正常對(duì)照組分別為25.65±10.80U/L、22.40±8.75U/L、90.85±35.51U/L、31.60±16.29U/L、13.90±10.90μmol/L、5.59±4.16μmol/L兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。AIH組IgG、gM、IgA,分別為1824.95±753.54mg/dL、141.13±63.04mg/dL、284.10±176.03mg/dL,正常組為1182.70±325.12mg/dL、165.20±90.23mg/dL.229.00±119.16mg/dL,兩組IgG相比,有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.01)；而IgM, IgA,兩組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。AIH組HAI評(píng)分為7.60±±4.51分。 1.3AIH組CD3+CD4+T和CD3+CD8+T細(xì)胞百分比分別與血清ALT、AST、肝臟HAI評(píng)分呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r=0.896、0.879、0.763(P0.01)和r=0.877、0.843、0.642(P0.01),與ALP、γ-GT、TBIL、DBIL無(wú)明顯相關(guān)性(P0.05);AIH組患者的B細(xì)胞亞群CD5+CD19+B細(xì)胞百分比分別與肝功能指標(biāo)ALT、AST呈正相關(guān),相關(guān)系數(shù)r分別為0.486,0.450(P0.05),與HAI評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.544,P0.05),與ALP、GGT、TBIL、DBIL無(wú)相關(guān)性(P0.05)；CD5+CD19+B細(xì)胞比率與IgG呈顯著正相關(guān)(r=0.802,P0.01),與IgM、IgA無(wú)相關(guān)性(P0.05)。 2MSCs治療后肝組織中CD3、IFN-γ、PD-1和PD-L1表達(dá)。 2.1MSCs治療組在造模時(shí)、治療后1周、4周三個(gè)時(shí)間點(diǎn)CD3+細(xì)胞的百分比分別為36.00±5.07%、27.94±2.33%、21.58±4.60%,組內(nèi)相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),治療后1周、4周與造模時(shí)相比,CD3+細(xì)胞百分比分別下降了22%和40%。且在治療后1周與4周時(shí),MSCs治療組與PBS治療組組間相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.784,P0.05vs t=4.409,P0.05)。 2.2MSCs治療組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)IFN-γ陽(yáng)性細(xì)胞百分比分別為30.06±5.19%、26.52±3.88%、20.86±3.35%,組內(nèi)相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在治療后1周、4周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與造模時(shí)相比,IFN-γ陽(yáng)性細(xì)胞百分比分別下降了12%和31%。在治療后1周與4周,MSCs治療組與PBS治療組組間相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.182,P0.05vst=4.679,P0.05)。 2.3MSCs治療組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)PD-1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率分別為17.92±4.29%、13.24±2.71%、10.98±2.47%,組內(nèi)相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在治療后1周、4周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn),與造模時(shí)相比,PD-1陽(yáng)性細(xì)胞百分比分別下降了26%和39%。在治療后1周與4周,MSCs治療組與PBS治療組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.862,P0.05vst=,4.289,P0.05)。 2.4MSCs治療組三個(gè)時(shí)間點(diǎn)PD-L1陽(yáng)性細(xì)胞百分比分別為3.12±1.19%、8.94±3.39%、12.38±4.20%,組內(nèi)相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),在治療后1周與4周,MSCs干預(yù)后,PD-L1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),分別比造模時(shí)上升了1.9倍和3倍。同時(shí),MSCs治療組與PBS治療組組間相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=.-4.87,P0.05vs t=6.15,P0.05)。 結(jié)論 1、AIH患者外周血CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、CD19+B細(xì)胞、CD5+CD19+B細(xì)胞百分比以及CD5+CD19+B/CD19+B細(xì)胞比值,較正常人明顯升高；并且與AIH患者肝功能指標(biāo)ALT、AST、IgG及HAI呈正相關(guān)關(guān)系,提示T、B淋巴細(xì)胞亞群的異常表達(dá)增高與肝損害程度相一致。 2、AIH患者的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞數(shù)量較正常人相比,并沒(méi)有明顯減少,說(shuō)明調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量變化在AIH的致病過(guò)程中并未發(fā)揮作用。 3、AIH小鼠MSCs移植治療后,肝組織中CD3+、IFN-γ與PD-1的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率明顯下降,而PD-L1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)率明顯增高,說(shuō)明MSCs可能通過(guò)抑制細(xì)胞因子表達(dá)及調(diào)控PD-1通路的免疫調(diào)節(jié)作用而具有治療AIH的作用。
【學(xué)位單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2013
【中圖分類(lèi)】：R575.1
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)/符號(hào)說(shuō)明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、自身免疫性肝炎患者外周血淋巴細(xì)胞亞群異常改變與肝炎活動(dòng)程度的相關(guān)性研究
    1.1 對(duì)象和方法
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)資料
        1.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 AIH淋巴細(xì)胞亞群改變
        1.2.2 AIH組與正常對(duì)照組患者肝功能、免疫球蛋白、及HAI改變
        1.2.3 AIH組淋巴細(xì)胞亞群改變與肝功能、免疫球蛋白及HAI的相關(guān)分析
    1.3 討論
        1.3.1 AIH患者T淋巴細(xì)胞亞群與臨床肝功能、肝炎活動(dòng)度的相關(guān)性
        1.3.2 AIH患者B淋巴細(xì)胞亞群與血清免疫球蛋白的相關(guān)性
        1.3.3 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與AIH
    1.4 小結(jié)
二、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞調(diào)控PD-1通路治療小鼠自身免疫性肝炎的實(shí)驗(yàn)研究
    2.1 對(duì)象和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 MSCs治療前后CD3在肝組織中的表達(dá)情況
        2.2.2 MSCs治療前后IFN-γ在肝組織中的表達(dá)情況
        2.2.3 MSCs治療前后PD-1在肝組織中的表達(dá)情況
        2.2.4 MSCs治療前后PD-L1在肝組織中的表達(dá)情況
    2.3 討論
        2.3.1 PD-1通路在AIH發(fā)病過(guò)程中所起的作用
        2.3.2 MSCs調(diào)控PD-1通路治療AIH的機(jī)制探討
    2.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
綜述 自身免疫性肝炎發(fā)病機(jī)制與治療的研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝

【參考文獻(xiàn)】

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3 趙宗豪,梅俏,吳軍,胡詠梅,徐新華,許建明;褪黑素保護(hù)大鼠慢性肝損傷的動(dòng)態(tài)觀察[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2003年04期

4 范列英,仲人前;自身免疫性肝炎分子免疫機(jī)制研究進(jìn)展[J];中華消化雜志;2003年01期

本文編號(hào)：2864584