目的 通過檢測自身免疫性肝炎(Autoimmune hepatitis, AIH)患者的外周血T淋巴細胞亞群、B淋巴細胞亞群和調節(jié)性T細胞表達,分析其與肝功能、免疫球蛋白和肝臟炎癥活動指數(shù)(Hepatitis activity index, HAI)的相關性,了解淋巴細胞亞群在AIH發(fā)病中的作用機制,為AIH的診治提供依據(jù)。對接受骨髓間充質干細胞(Mesenchymal stem cells, MSCs)移植治療的AIH模型小鼠肝組織內CD3+細胞、干擾素-γ(Interferon-y, IFN-γ)、程序性死亡分子1(Programmed death-1,PD-1)、程序性死亡配體-1(Programmed death ligand-1, PD-L1)表達進行檢測,初步探討MSCs通過PD-1通路免疫調控治療AIH的機制。 方法 1、選擇確診為AIH且未接受激素及免疫抑制劑治療的患者20例,為AIH組,以20例健康成年人為對照組。兩組分別進行肝功能指標(血清谷丙轉氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、堿性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、γ-谷胺酰轉移酶(y-glutamyltransferase,y-GT))、血清總膽紅素(Total bilirubin,TBIL)、直接膽紅素(Direct bilirubin,DBIL);免疫球蛋白(免疫球蛋白G (immunoglobulin G, IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M, IgM)、免疫球蛋白A(immunoglobulin A, IgA))的檢測；AIH組行肝穿刺活組織病理檢查,評價肝炎活動性指數(shù)HAI。應用流式細胞術分別檢測兩組外周血T、B淋巴細胞亞群表面標志的表達情況,并將淋巴細胞亞群比率與肝功能指標、免疫球蛋白及HAI評分進行相關性分析。 2、以AIH模型小鼠接受MSCs移植治療,分為MSCs治療組、PBS對照治療組和正常對照組,三組分別于造模時、治療后1周、4周三個時間點取鼠肝組織。三組小鼠不同時間點肝組織樣本數(shù)均為10個。用免疫組化方法檢測各組小鼠各時間點肝組織內CD3+、IFN-γ、PD-1和PD-L1的表達情況。 結果 1.AIH患者外周血淋巴細胞亞群異常改變與肝功能、免疫球蛋白和肝炎活動指數(shù)的關系 1.1AIH組外周血CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD19+B、CD5+CD19+B細胞百分比及CD5+CD19+B/CD19+B細胞比值分別為46.00±16.84%、34.26±11.60%、13.6±5.55%、8.45±6.09%、0.62土0.15,均明顯高于對照組的35.50±3.59%、25.21±2.89%、9.85±1.21%、2.84±0.92%、0.29±0.10,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。AIH組CD3+T細胞百分比、CD4+CD25+CD127dim T細胞百分比和CD3+CD4+T/CD3+CD8+T細胞比值分別為64.23±13.24%、5.59±2.17%、1.30±±0.25,而對照組為69.38±4.32%、6.09±1.36%、1.42±0.19,兩組相比差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 1.2AIH組ALT、AST、ALP、γ-GT、TBIL、DBIL分別為197.00±183.915U/L188.65±180.00U/L、189.30±38.10U/L、148.00±39.61U/L、87.88±114.88μmol/L、59.97±83.91μmol/L;正常對照組分別為25.65±10.80U/L、22.40±8.75U/L、90.85±35.51U/L、31.60±16.29U/L、13.90±10.90μmol/L、5.59±4.16μmol/L兩組相比差異有統(tǒng)計學意義。AIH組IgG、gM、IgA,分別為1824.95±753.54mg/dL、141.13±63.04mg/dL、284.10±176.03mg/dL,正常組為1182.70±325.12mg/dL、165.20±90.23mg/dL.229.00±119.16mg/dL,兩組IgG相比,有明顯統(tǒng)計學差異(P0.01)；而IgM, IgA,兩組相比無統(tǒng)計學差異(P0.05)。AIH組HAI評分為7.60±±4.51分。 1.3AIH組CD3+CD4+T和CD3+CD8+T細胞百分比分別與血清ALT、AST、肝臟HAI評分呈正相關,相關系數(shù)r=0.896、0.879、0.763(P0.01)和r=0.877、0.843、0.642(P0.01),與ALP、γ-GT、TBIL、DBIL無明顯相關性(P0.05);AIH組患者的B細胞亞群CD5+CD19+B細胞百分比分別與肝功能指標ALT、AST呈正相關,相關系數(shù)r分別為0.486,0.450(P0.05),與HAI評分呈正相關(r=0.544,P0.05),與ALP、GGT、TBIL、DBIL無相關性(P0.05)；CD5+CD19+B細胞比率與IgG呈顯著正相關(r=0.802,P0.01),與IgM、IgA無相關性(P0.05)。 2MSCs治療后肝組織中CD3、IFN-γ、PD-1和PD-L1表達。 2.1MSCs治療組在造模時、治療后1周、4周三個時間點CD3+細胞的百分比分別為36.00±5.07%、27.94±2.33%、21.58±4.60%,組內相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),治療后1周、4周與造模時相比,CD3+細胞百分比分別下降了22%和40%。且在治療后1周與4周時,MSCs治療組與PBS治療組組間相比,差異有統(tǒng)計學意義(t=3.784,P0.05vs t=4.409,P0.05)。 2.2MSCs治療組三個時間點IFN-γ陽性細胞百分比分別為30.06±5.19%、26.52±3.88%、20.86±3.35%,組內相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),在治療后1周、4周兩個時間點,與造模時相比,IFN-γ陽性細胞百分比分別下降了12%和31%。在治療后1周與4周,MSCs治療組與PBS治療組組間相比,差異有統(tǒng)計學意義(t=3.182,P0.05vst=4.679,P0.05)。 2.3MSCs治療組三個時間點PD-1陽性細胞表達率分別為17.92±4.29%、13.24±2.71%、10.98±2.47%,組內相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),在治療后1周、4周兩個時間點,與造模時相比,PD-1陽性細胞百分比分別下降了26%和39%。在治療后1周與4周,MSCs治療組與PBS治療組相比,差異有統(tǒng)計學意義(t=3.862,P0.05vst=,4.289,P0.05)。 2.4MSCs治療組三個時間點PD-L1陽性細胞百分比分別為3.12±1.19%、8.94±3.39%、12.38±4.20%,組內相比,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05),在治療后1周與4周,MSCs干預后,PD-L1陽性細胞表達,分別比造模時上升了1.9倍和3倍。同時,MSCs治療組與PBS治療組組間相比,差異有統(tǒng)計學意義(t=.-4.87,P0.05vs t=6.15,P0.05)。 結論 1、AIH患者外周血CD4+T細胞、CD8+T細胞、CD19+B細胞、CD5+CD19+B細胞百分比以及CD5+CD19+B/CD19+B細胞比值,較正常人明顯升高；并且與AIH患者肝功能指標ALT、AST、IgG及HAI呈正相關關系,提示T、B淋巴細胞亞群的異常表達增高與肝損害程度相一致。 2、AIH患者的調節(jié)性T細胞數(shù)量較正常人相比,并沒有明顯減少,說明調節(jié)性T細胞的數(shù)量變化在AIH的致病過程中并未發(fā)揮作用。 3、AIH小鼠MSCs移植治療后,肝組織中CD3+、IFN-γ與PD-1的陽性細胞表達率明顯下降,而PD-L1陽性細胞表達率明顯增高,說明MSCs可能通過抑制細胞因子表達及調控PD-1通路的免疫調節(jié)作用而具有治療AIH的作用。
【學位單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2013
【中圖分類】：R575.1
【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、自身免疫性肝炎患者外周血淋巴細胞亞群異常改變與肝炎活動程度的相關性研究
    1.1 對象和方法
        1.1.1 實驗資料
        1.1.2 實驗方法
        1.1.3 統(tǒng)計學處理
    1.2 結果
        1.2.1 AIH淋巴細胞亞群改變
        1.2.2 AIH組與正常對照組患者肝功能、免疫球蛋白、及HAI改變
        1.2.3 AIH組淋巴細胞亞群改變與肝功能、免疫球蛋白及HAI的相關分析
    1.3 討論
        1.3.1 AIH患者T淋巴細胞亞群與臨床肝功能、肝炎活動度的相關性
        1.3.2 AIH患者B淋巴細胞亞群與血清免疫球蛋白的相關性
        1.3.3 調節(jié)性T細胞與AIH
    1.4 小結
二、骨髓間充質干細胞調控PD-1通路治療小鼠自身免疫性肝炎的實驗研究
    2.1 對象和方法
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗方法
        2.1.3 統(tǒng)計學處理
    2.2 結果
        2.2.1 MSCs治療前后CD3在肝組織中的表達情況
        2.2.2 MSCs治療前后IFN-γ在肝組織中的表達情況
        2.2.3 MSCs治療前后PD-1在肝組織中的表達情況
        2.2.4 MSCs治療前后PD-L1在肝組織中的表達情況
    2.3 討論
        2.3.1 PD-1通路在AIH發(fā)病過程中所起的作用
        2.3.2 MSCs調控PD-1通路治療AIH的機制探討
    2.4 小結
結論
參考文獻
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 自身免疫性肝炎發(fā)病機制與治療的研究進展
    綜述參考文獻
致謝

【參考文獻】

相關期刊論文 前4條

1 馬勇;丁體龍;袁福華;夏志學;;自身免疫性肝炎大鼠外周血CD4~+細胞、肝細胞特異性脂蛋白抗體及Th細胞因子水平之間的相關性[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年28期

2 倪勛;賈永前;孟文彤;鐘凌;曾彥;;B7-H1在人骨髓間充質干細胞上的表達及其對T淋巴細胞增殖的影響[J];中國實驗血液學雜志;2009年04期

3 趙宗豪,梅俏,吳軍,胡詠梅,徐新華,許建明;褪黑素保護大鼠慢性肝損傷的動態(tài)觀察[J];安徽醫(yī)科大學學報;2003年04期

4 范列英,仲人前;自身免疫性肝炎分子免疫機制研究進展[J];中華消化雜志;2003年01期

本文編號：2864584