目的 正常腸上皮作為物理屏障限制腸道微生物入侵宿主。腸上皮細胞(Intestinal epithelial cells，IEC)極低表達TLR4和MD2，不與脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)反應。同時也產生許多效應分子抵御腔內微生物，維持天然防御反應�？咕�-如人類β防御素2(human β-defensin 2，HBD2)便是其中一類，其表達受細菌感染和促炎因子的調控。本研究以細胞因子TNF-α、IL-β、IFN-γ及LPS刺激HT-29結腸癌細胞系后，探討HT-29細胞TLR4、MD2及HBD2在轉錄和蛋白水平的表達變化，及其與NF-κB激活的關系。 材料和方法 1 HT-29細胞分為8組，分別加入RPMI1640、TNF-α(20ng／ml)、IL-1β(20ng／ml)、IFN-γ(20ng／ml)、LPS(50ng／ml)、TNF-α(20ng／ml)+LPS(50ng／ml)、IL-1β(20ng／ml)+LPS(50ng／ml)、IFN-γ(20ng／ml)+LPS(50ng／ml)干預。 2 ELISA方法測定各組HT-29細胞上清液IL-8水平。 3 RT-PCR方法檢測各組HT-29細胞TLR4、MD2、HBD2 mRNA表達。 4 免疫印跡方法檢測各組HT-29細胞TLR4和NF-κB蛋白表達。 結果 1 細胞因子和細胞因子加LPS組上清液IL-8的表達顯著高于對照組(p＜0.01)：HT-29細胞與細胞因子預孵育后再以LPS刺激，IL-8的表達進一步升高(p＜0.01)。 2 細胞因子和細胞因子加LPS顯著上調HT-29細胞TLR4和MD2mRNA的表達
【學位單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2005
【中圖分類】：R574.62
【部分圖文】：

p<.005;**vs對照組，p<0.01.33免疫印跡法測定TLR4與NF一KB在各組H-T29細胞中的表達33.1TLR4在各組H-T29細胞中的表達(圖1一3，表1一3)圖1一3.TLR4蛋白在H-T”細胞中的表達表1一3.TLR4蛋白在各組H-T29細胞中的表達組別H不29(一)TNF一aIL一lpINF一YLPSLPS+丁NF一aLPS+IL一lpLPS+INF一y灰度值(mean土SD)2174士672575士306二270.9士4.5二253葉8.2.*2236士24.3254.6土244*.249.肚227**255.葉227****vs.對照組，p<0.013.3.1.1NTF一a、IL一lp、IFN一Y、LPS+INF一a、LPS+IL一lp、LpS+IFN一丫組TLR4的表達明顯高于對照和LPS組，p<0.01。2!

.3對照與LPS組TLR4的表達無統(tǒng)計學差異，p>.005。.3.32NF一KB蛋白在各組H-T29細胞胞核中的表達(圖1一4，表1一4)圖1一4.NF一KB蛋白在H-T29細胞胞核中的表達表1一4.NF一KB蛋白在各組H-T29細胞胞核中的表達灰度誼(均數(shù)士標準差)H-T29卜)2375土10230275士2833158士!12IFNy3092土129LPS+INF一u2712士2」23569士129LPS，IL一lp3625士196LPS+IFN一Y3750士2353.3.2.ITNF一a、IL一lp、IFN一丫、LpS、LPS+TNF一a、LPS+IL一lp、LPS+IFN一丫組NF一KB的表達明顯高于陰性對照，p<.001。3.3.2‘2LPs+州F一a、Lps+IL一lp、LpS+IFN一丫組NF一KB的表達顯著高于NTF一a、IL一lp、IFN一丫、LPS組，夕<0.05。3.3.2.3NTF一a、LI一lp、FIN一了組NF一KB的表達顯著高于LPS組，p<.005。3.3.2.4T’NF一。、LI一lp、FIN一Y組NF一KB的表達無顯著差異，p>.005。3.3.2.5LPS+NTF一。、LPs十LI一lp、LPs十FIN一Y組NF一KB的表達無顯著差異，P>0.05。討論腸上皮細胞是宿主粘膜屏障重要的組成部分。腸上皮一方面必須對存在的天然菌群保持“沉默”

A組(夕<0.05)。3.3各組結腸上皮GAPDHmRNA的表達無顯著差異P(>0.05)。4免疫印跡測定各組小鼠結腸粘膜TLR4蛋白的表達(圖2一S，表2一8)圖2一5.TLR4蛋白在小鼠結腸上皮中的表達42
【參考文獻】

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1 歐陽欽,潘國宗,溫忠慧,萬學紅,胡仁偉,林三仁,胡品津;對炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的建議[J];中華消化雜志;2001年04期

本文編號：2864407