目的：研究硫化氫在大鼠肝臟缺血再灌注損傷（Ischemia Reperfusion，IR）中的保護(hù)作用及機(jī)制。 方法：通過(guò)肝動(dòng)脈結(jié)扎術(shù)構(gòu)建大鼠缺血再灌注損傷模型，依次分為假手術(shù)組(Sham組)，缺血再灌注損傷組（IR組）及缺血再灌輸損傷+硫化氫保護(hù)組（IR+NaHS組）；以TUNEL原位染色及流式細(xì)胞儀分析三組動(dòng)物模型的肝細(xì)胞凋亡情況，檢測(cè)肝細(xì)胞損傷指標(biāo)ALT濃度，Real time-PCR、Western blots分析外源性硫化氫對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)急（Endoplasmic reticulum stress，ERS）信號(hào)通路關(guān)鍵分子活化轉(zhuǎn)錄因子6（activating transcription factor6，ATF6）及促凋亡分子CCAAT／增強(qiáng)子結(jié)合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein, CHOP)基因m RNA和蛋白表達(dá)的影響。 結(jié)果：TUNEL原位凋亡及流式細(xì)胞儀分析結(jié)果顯示，IR組大鼠肝細(xì)胞凋亡較假手術(shù)組明顯增加（P 0.05），而IR+NaHS組大鼠肝細(xì)胞凋亡較IR組明顯減少（P 0.05）；大鼠肝細(xì)胞損傷標(biāo)志物谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT在IR組較假手術(shù)組明顯增加，但I(xiàn)R+NaHS組較IR組大鼠血清中ALT下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；IR組大鼠肝組織ATF6、CHOP mRNA及蛋白表達(dá)較假手術(shù)組明顯增加，IR+NaHS組ATF6及CHOP mRNA及蛋白表達(dá)較IR組明顯減少（P 0.05）。 結(jié)論：成功構(gòu)建SD大鼠肝臟缺血再灌注損傷的模型；硫化氫通過(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)急關(guān)鍵信號(hào)通道ATF6-CHOP基因表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生對(duì)大鼠肝臟缺血再灌注損傷的保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：青海大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2014
【中圖分類】：R575
【部分圖文】：

162.5 技術(shù)路線圖2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean ± SEM）表示，隨機(jī)區(qū)組方差分析、Student’s t 檢驗(yàn)分析各實(shí)驗(yàn)組大鼠數(shù)據(jù)變量，以 α =0.05 作為統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)水準(zhǔn)。統(tǒng)計(jì)分析采用 SPSS 16.0 軟件包（SPSS Inc., Chicago, IL, USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

19圖 2表 2 大鼠肝臟細(xì)胞懸液流式細(xì)胞儀（Annexin+PI）凋亡分析（凋亡率 x—±組別 6h(N=7) 12h(N=7)Sham 組 1.24±0.021 1.53±0.34IR 組 24.53±2.58 32.43±7.29IR-NaHS 組 19.14±3.56* 15.05±2.25#F 125.571 73.901P ＜0.0001 ＜0.0001* vs IR, P=0.04 # vs IR, P＜0.00011 .TUNEL 原位凋亡染色分析 Sham(A，E），IR 組（B，F(xiàn)）和 IR-NaHS

圖 3 三組大鼠缺血再灌注損傷 6h、12h 后血清中 ALT 濃度。 H2S 抑制大鼠缺血再灌注損傷肝組織中 ATF6-CHOP mRNA 和達(dá)TF6-CHOP 是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)急及凋亡相關(guān)信號(hào)通道的關(guān)鍵分子，通過(guò)對(duì)大鼠注損傷 6h、12h 后肝組織中 ATF6，CHOP mRNA 和蛋白表達(dá)進(jìn)行研究，e-PCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，在 IR 組 12h 后 ATF6 mRNA 定量分析較 Sham 組。IR-NaHS 大鼠肝細(xì)胞中 ATF6 mRNA 表達(dá)較 IR 組呈減少趨勢(shì)。在 IROP mRNA 表達(dá)量較 Sham 組明顯增加，而 IR-NaHS 組大鼠肝細(xì)胞中 CNA 表達(dá)量較 IR 組顯著減少（* P < 0.05）。詳見(jiàn)圖 4A、表 4。Western bl組大鼠肝細(xì)胞中 ATF6，CHOP 蛋白的表達(dá)與其 mRNA 表達(dá)一致，見(jiàn)圖。別 例數(shù)ATF6 CHOP6h 12h 6h m 組 7 32249.26±727.02 ▽27068.68±3537.65▽28009.949±14748.7721924.6
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2864342