第一部分槲皮素對抗慢性飲酒大鼠胃黏膜細(xì)胞過度增殖的作用 目的:研究食物中一種主要的黃酮類物質(zhì)——槲皮素對抗慢性飲酒引起胃黏膜過度增生的作用及其機(jī)制。 方法:40只雄性SD大鼠(200～250g)隨機(jī)分為4組:對照組(飲用自來水)、酒精處理組(以6%酒精作為唯一飲用水來源)、槲皮素處理組(每天100mg/kg槲皮素灌胃)和酒精+槲皮素組(飲酒的同時(shí)每天100mg/kg槲皮素灌胃)。免疫印跡法測定增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和細(xì)胞周期蛋白D_1(Cyclin D_1)表達(dá)以檢測大鼠胃黏膜的細(xì)胞增殖。TBARS水平、蛋白羰基含量被用來作為胃黏膜氧化損傷的指標(biāo)。硝酸鹽/亞硝酸鹽水平、硝基酪氨酸水平被用來檢測胃黏膜NO的產(chǎn)生量。同時(shí)也用免疫印跡法檢測了iNOS和nNOS的表達(dá)。 結(jié)果:和對照組相比,酒精處理7天的大鼠胃黏膜細(xì)胞增殖顯著增加,同時(shí)伴有脂質(zhì)過氧化和蛋白質(zhì)氧化水平增高、NO產(chǎn)生量降低和nNOS活性降低。這些作用可被槲皮素部分反轉(zhuǎn)。 結(jié)論:槲皮素可對抗慢性飲酒引起的胃黏膜細(xì)胞過度增生。這種作用是其消除自由基引起的,此外,還可能與其增強(qiáng)nNOS活性、增加NO產(chǎn)生有關(guān)。 第二部分外源性間充質(zhì)干細(xì)胞在損傷胃黏膜內(nèi)的增殖及其作用 目的:研究體外培養(yǎng)和擴(kuò)增的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrowmesenchymal stem cells,BMMSCs)對損傷胃黏膜修復(fù)的促進(jìn)作用。 方法:體外培養(yǎng)擴(kuò)增β-gal轉(zhuǎn)基因小鼠的骨髓MSCs細(xì)胞。健康雄性C57BL/6小鼠(體重18～22g),90只,隨機(jī)分為對照組和實(shí)驗(yàn)組,實(shí)驗(yàn)組又分為移植和非移植組,每組30只。實(shí)驗(yàn)組用0.2ml純酒精灌胃,造成胃損傷模型。酒精灌胃2 h后,移植組小鼠經(jīng)尾靜脈注射MSCs(0.5×10~6/只);非移植組小鼠尾靜脈注射和移植組同體積的PBS。對照組小鼠0.2ml生理鹽水灌胃2 h后,經(jīng)尾靜脈注射MSCs(0.5×10~6/只)進(jìn)行細(xì)胞移植。潰瘍指數(shù)評分評價(jià)胃黏膜損傷的程度。免疫組化檢測Brdu陽性細(xì)胞評價(jià)細(xì)胞增殖。β-gal陽性細(xì)胞評價(jià)MSCs細(xì)胞的數(shù)量及分布。Brdu-β-gal免疫雙重染色評價(jià)MSCs細(xì)胞的增殖。植物血凝素UEA-1和β-gal雙重染色評價(jià)MSCs細(xì)胞的分化。 結(jié)果:MSCs移植后,在損傷胃黏膜可發(fā)現(xiàn)MSCs聚集于損傷部位,并大量增殖,可分化為胃黏膜上皮細(xì)胞;而在未損傷胃黏膜僅發(fā)現(xiàn)有少量MSCs細(xì)胞散在分布,未發(fā)現(xiàn)有MSCs細(xì)胞分化而來的胃黏膜上皮細(xì)胞。酒精誘導(dǎo)胃黏膜損傷后,MSCs移植組的損傷指數(shù)較未移植組顯著降低。 結(jié)論:靜脈注射MSCs細(xì)胞可聚集于胃黏膜損傷部位,MSCs細(xì)胞可在損傷的胃黏膜內(nèi)增殖分化并加快損傷胃黏膜的修復(fù)過程。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2008
【中圖分類】：R573
【部分圖文】：

結(jié)果1.姍皮素抑制酒精誘導(dǎo)的胃私膜細(xì)胞過度增殖蛋白免疫印跡結(jié)果顯示，飲酒大鼠胃私膜中PCNA和CychnDI兩種蛋白的表達(dá)量較對照組顯著增加(P<0.01);而料皮素和酒精處理后較酒精組顯著降低(圖1)(P<0.05)。我們用免疫組化方法和計(jì)算機(jī)圖像分析進(jìn)一步確認(rèn)，在慢性飲酒7天后，大鼠胃底腺的PCNA陽性細(xì)胞數(shù)較對照組顯著增多(P<0.01);而酒精+姍皮素處理組較酒精組顯著減少(P<0.05)，而酒精+概皮素組與櫥皮素組和對照組三組的PCNA陽性細(xì)胞數(shù)量相近(圖2，O、、.了11.表E+Q一

正常小鼠酒精處理后引起了3一NT的顯著降低，而聯(lián)合應(yīng)用酒精和料皮素又使3一NT水平顯著回升，單獨(dú)料皮素處理組3一NT水平較對照組輕度升高。這說明樹皮素抑制了酒精誘導(dǎo)的3一NT的降低，與胃彩膜中峭酸鹽/亞硝酸鹽水平及nNOS表達(dá)結(jié)果一致。表2大鼠胃私膜中Nox和NT的含量(x幻)ControlEthanolEthanol+QuercetinQuereetinNox(林mol/L)一33士0.477.98士0.33’9.59士0.62#12.1肚0.52Nitrotyrosine(林mo一zL)5.99士一356.85士0.46‘8.07士一21#10.85士一03與酒精組比較，‘尸<0.05;與對照組比較爭<0.01。

結(jié)果1.體外培養(yǎng)的MSCs生物學(xué)特征1.1MSCs體外培養(yǎng)的形態(tài)學(xué)及生長特點(diǎn)MSCs采用全骨髓貼壁方法培養(yǎng)，原代培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)多樣復(fù)雜，成梭形、扁平形、多角形等，為不均質(zhì)細(xì)胞，3天后可觀察到集落形成;隨著細(xì)胞傳代的進(jìn)行，梭形細(xì)胞逐漸增多并占主導(dǎo)優(yōu)勢，而非均質(zhì)細(xì)胞逐漸減少;傳至第三代時(shí)，細(xì)胞形態(tài)較為均一，多數(shù)成典型的紡錘樣成纖維細(xì)胞形態(tài)，細(xì)胞生長狀態(tài)良好，達(dá)融合時(shí)成輻射狀或漩渦狀集落排歹，」(如圖l)。
【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 孫雪蓮;黃芪苷對胃粘膜損傷的保護(hù)作用研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2011年

本文編號：2864274