【目的】潰瘍性結(jié)腸炎是一種結(jié)直腸黏膜的非特異性慢性炎癥性病變,遷延難愈,且發(fā)病趨勢逐年升高,其發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚。越來越多的研究表明,腸黏膜免疫調(diào)節(jié)紊亂是其發(fā)病的主要環(huán)節(jié),其中Th17細(xì)胞發(fā)揮重要作用。Naive T細(xì)胞經(jīng)過IL-6/STAT3通路在轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt的作用下向Th17細(xì)胞分化,通過分泌主要效應(yīng)細(xì)胞因子IL-17A誘導(dǎo)并維持慢性炎癥反應(yīng)。自分泌運動因子-溶血磷脂酸(ATX-LPA)軸參與了多種疾病慢性炎癥過程,研究顯示ATX在慢性炎癥性腸病結(jié)腸組織中表達(dá)亦升高,然其作用及機(jī)制研究尚不完全明確。本實驗研究目的在于探討慢性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠模型中,ATX-LPA軸能否通過調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的分化產(chǎn)生致病效應(yīng),及復(fù)方苦參湯(Compound Sophorae decoction,CSD)能否通過干預(yù)ATX-LPA軸發(fā)揮治療作用和治療的最佳劑量,有助于闡明慢性潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病機(jī)制并提供新的治療研究途徑。【方法】60只SPF級Balb/c雄鼠隨機(jī)分為6組:正常組、模型組、抑制劑組、中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組,每組10只。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,除正常組外,其余各組給與2.5%DSS水溶液口服7天后正常飲水7天,循環(huán)3個周期。自造模開始,抑制劑組每隔一天給予硫雙二氯酚1mg腹腔注射,模型組給與相同體積溶劑腹腔注射,至造模完成;中藥低劑量組、中藥中劑量組、中藥高劑量組自第三周期開始每天給予0.4m L不同濃度中藥水煎液灌胃。造模過程中每天觀察小鼠精神狀態(tài)、進(jìn)食、活動度、大便性狀及有無血便,記錄小鼠體重。造模完成,處死小鼠,取脾臟、腸系膜淋巴結(jié),流式細(xì)胞術(shù)檢測Th17細(xì)胞占淋巴細(xì)胞比例;測量結(jié)腸長度,PBS輕輕沖洗干凈后稱重,部分組織置于4%多聚甲醛固定,用于HE染色觀察結(jié)腸組織病理改變;其余組織立即置于-80℃保存用于其他檢測。用Western blot檢測結(jié)腸組織中ATX、MAd CAM-1蛋白的表達(dá)量,熒光定量PCR檢測結(jié)腸組織中ATX、MAd CAM-1、LPAR、IL-6、STAT3、ROR-γt、IL-17A、IL-21 m RNA的含量�！窘Y(jié)果】經(jīng)DSS造模后,小鼠活動度差,出現(xiàn)稀便血便,體重明顯下降,與正常組相比,模型組小鼠脾臟、腸系膜淋巴結(jié)中Th17細(xì)胞比例明顯升高(P0.05),結(jié)腸組織中ATX、MAd CAM-1蛋白表達(dá)量和ATX、MAd CAM-1、LPAR、IL-6、STAT3、ROR-γt、IL-17A、IL-21m RNA的表達(dá)量也顯著性增加(P0.05),而相較于抑制劑組,Th17細(xì)胞比例及上述指標(biāo)表達(dá)量均下降,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。給予中藥干預(yù)后,相較于模型組,中藥低劑量、中劑量、高劑量組Th17細(xì)胞比例及上述指標(biāo)表達(dá)量均呈下降趨勢,其中中藥中劑量組各指標(biāo)下降趨勢最大,相較于模型組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),而中藥中劑量組相較于抑制劑組、中藥低劑量組和中藥高劑量組部分差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義�！窘Y(jié)論】1.ATX-LPA軸可以參與DSS誘導(dǎo)的慢性潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病過程,加劇腸道炎癥及腸黏膜損害;2.ATX-LPA軸可能通過促進(jìn)Th17細(xì)胞分化參與慢性潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)病過程;3.抑制ATX-LPA軸能減少Th17細(xì)胞分化而緩解腸道炎癥,起到治療作用,中藥復(fù)方苦參湯也能通過抑制該軸發(fā)揮效應(yīng),且中劑量為最佳選擇。
【學(xué)位單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R574.62
【部分圖文】：

2.5%含 DSS 飲用水造模 3 周期后，除正常組外，其血便、食欲減退、體重下降、精神狀態(tài)差、活動度下降炎癥狀。與模型組小鼠相比，抑制劑組自第 1 周期造模相對較�。恢兴幐鲃┝拷M自第 3 周期開始，血便及體重中中藥中劑量組效果明顯優(yōu)于中藥低劑量組及中藥高劑腸炎腸道粘膜長期處于炎癥與修復(fù)反復(fù)發(fā)作狀態(tài)，逐腸長度下降相對重量增加，因此結(jié)腸重量長度比升高。重量長度比相較于其他各組明顯升高（*P＜0.05），中組明顯下降（#P＜0.05），與中藥低劑量組差異統(tǒng)計學(xué)

圖 2. 小鼠結(jié)腸重量長度比慢性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)的影響組織中，腸黏膜上皮細(xì)胞完整，腺體排列整齊，內(nèi)小鼠結(jié)腸壁明顯增厚，腺體紊亂或消失，大量炎；抑制劑組及中藥各劑量組可見腸壁增厚，腺體浸潤，其中中藥中劑量組腺體排列相對整齊，炎性A B

圖 2. 小鼠結(jié)腸重量長度比3.2ATX-LPA 軸對慢性潰瘍性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織病理學(xué)的影響正常小鼠結(jié)腸組織中，腸黏膜上皮細(xì)胞完整，腺體排列整齊，內(nèi)含大量杯結(jié)構(gòu)正常；模型組小鼠結(jié)腸壁明顯增厚，腺體紊亂或消失，大量炎性細(xì)胞浸下層可見新生血管；抑制劑組及中藥各劑量組可見腸壁增厚，腺體排列紊亂胞減少及炎性細(xì)胞浸潤，其中中藥中劑量組腺體排列相對整齊，炎性細(xì)胞數(shù)量3）。A B C
【參考文獻(xiàn)】

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1 范恒;張麗娟;鐘敏;劉星星;段雪云;左冬梅;唐慶;;復(fù)方苦參湯對潰瘍性結(jié)腸炎DOR-β-arrestin1-Bcl-2信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的干預(yù)作用[J];世界華人消化雜志;2013年08期

2 廖奕;范恒;陳小艷;張麗娟;;β-arrestin1在實驗性大鼠結(jié)腸炎發(fā)生機(jī)制中的作用及氧化苦參堿的干預(yù)作用[J];中國中西醫(yī)結(jié)合雜志;2010年10期

3 張聲生;;潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)診療共識意見[J];中華中醫(yī)藥雜志;2010年06期

4 范恒;段雪云;莊雄;呂建芳;壽折星;;烏梅丸對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠結(jié)腸組織NF-κB p65的影響[J];世界華人消化雜志;2008年08期

本文編號：2860265