背景非酒精脂肪肝病(NAFLD)是指除因酒精攝入過多、自身免疫、病毒感染等所導(dǎo)致的肝臟實質(zhì)細(xì)胞的脂肪變性。盡管目前NAFLD的機(jī)制和NASH的進(jìn)展機(jī)制尚不清楚,有人提出,可能與各種肝損傷形式相同的支鏈氨基酸紊亂有關(guān),在慢性肝病,特別是肝硬化中,支鏈氨基酸減少,芳香氨基酸增加。目前,較少使用HPLC-FLD法同時測定多種氨基酸的含量,因此,本文分為二個部分分別探討同時測定13種物質(zhì)含量的HPLC-FLD方法以及13種物質(zhì)在非酒精性脂肪病病程中的含量變化。第一部分小鼠腦組織中13種氨基酸的含量測定方法的建立目的:建立同時測定小鼠腦組織中13種物質(zhì)的HPLC-FLD方法。方法:采用安捷倫1260高效液相色譜儀。實驗檢測的激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為340 nm和455 nm。利用ODS2柱分離各分析物,柱溫為30℃。采用HPLC梯度洗脫法,以1mL·min~(-1)的流速進(jìn)行測定。流動相A為100%乙腈。流動相B為30 mmol·L~(-1)乙酸鈉水溶液。進(jìn)樣量為20μL,樣品單次運(yùn)行的總時間為45 min。小鼠腦組織經(jīng)預(yù)處理后柱前衍生化后進(jìn)樣測定分析。結(jié)果:13種目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R~2均大于0.9996,線性關(guān)系良好。除Val和Phe(0.9μmol·L~(-1))外,其余化合物的LOQ均低于0.1μmol·L~(-1),所有物質(zhì)的LOD均低于0.05μmol·L~(-1)。低、中、高濃度時,日內(nèi)精密度的RSD分別小于2.23%、4.41%和2.08%;日間精密度的RSD分別小于8.65%、3.90%和4.88%。準(zhǔn)確度表示為相對回收率(RR),RR在77.52%到111.58%之間。提取回收率在75.74%到96.42%之間。結(jié)論:本研究所建立的檢測13種氨基酸的HPLC-FLD方法適用于非酒精性脂肪肝病并發(fā)癥相關(guān)物質(zhì)的分離與測定。第二部分C57BL/6、RIP3、Mfge8和C3R各品系的雄性小鼠腦組織中13種氨基酸的含量測定目的:測定C57BL/6、RIP3、Mfge8和C3R共4個品系的雄性小鼠腦組織中13種氨基酸的含量,研究13種氨基酸的含量變化對非酒精性脂肪肝病的影響與相互關(guān)系。探討不同品系小鼠對非酒精脂肪小鼠模型建立的影響。方法:采用本文第一部分所建立的方法。結(jié)果:隨著喂養(yǎng)時間的增加,喂養(yǎng)MCD飼料9周后的C57BL/6小鼠腦組織中氨基酸均發(fā)生不同程度的變化,Asp、Gln、GABA和Ile的含量均能在一定程度上恢復(fù)正常,但在最后喂養(yǎng)18周后氨基酸含量又會出現(xiàn)顯著降低。通過對RIP3、Mfge8和C3R三個品系小鼠的比較,發(fā)現(xiàn)同樣喂養(yǎng)MCD飼料9周時,不同品系小鼠腦內(nèi)氨基酸的含量并沒有顯著性差別,且3個品系小鼠腦組織中各氨基酸的變化比較一致,均有Asp的變化。在同樣喂養(yǎng)MCD飼料18周時,Mfge8、RIP3和C3R小鼠腦組織中氨基酸含量存在差距的種類最多;而RIP3和C3R小鼠腦組織中氨基酸含量無明顯差別。結(jié)論:C57BL/6和Mfge8品系適合用于建立非酒精性脂肪病模型小鼠。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R575.5
【部分圖文】：

11圖2. 13種待測物質(zhì)及內(nèi)標(biāo)的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.2 The chemical structures of thirteen substances and internal standards (IS)

-1的 OPA 作為衍生化試劑。圖1.1 OPA用量對各待測物峰面積的影響Fig. 1.1 The effect of OPAamount on peak area of analytes3.3.2硼酸鈉緩沖溶液pH的選擇查閱文獻(xiàn)[31,32]發(fā)現(xiàn)，OPA 衍生化反應(yīng)在酸性環(huán)境下不穩(wěn)定，衍生化反應(yīng)不完全，而硼酸鈉緩沖液 pH 值為 7.6，不適合氨基酸的衍生化反應(yīng)。在我們以往的研究[30]中，在衍生化反應(yīng)過程中加入 10 μL1.0 mol·L-1碳酸鈉溶液來調(diào)節(jié)衍生化反應(yīng)環(huán)境的 pH 值，但此操作步驟在衍生化過程顯得過于繁瑣
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

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本文編號：2859710