不管是急性肝衰竭還是慢性肝衰竭，尚無哪一種治療方法能夠達到滿意的療效。人工肝、原位肝移植、肝細胞移植等治療方法已經用于臨床很長時間，但由于種種因素限制了它們的應用，如費用高、供體來源缺乏、長期服用免疫抑制劑等。這種狀況迫使人們去尋找更為有效和經濟的新方法。 90年代，造血干細胞的臨床應用逐漸開展起來，如地中海性貧血、白血病、實體瘤大劑量化療或／和放療后的造血恢復。在造血干細胞的臨床應用和研究中，人們發(fā)現骨髓干細胞具有多向分化潛能，在一定環(huán)境下，可以轉化為其它類型的成熟細胞如神經細胞、骨骼肌細胞等，人們推測骨髓中的干細胞可能是一個復雜的群體，具有不同的分化潛能和方向。 1999年有人報道骨髓造血干細胞可以轉化為肝細胞。如果能使患者自身骨髓干細胞增殖和向肝細胞選擇性分化，我們便可以用自身骨髓干細胞分化和增殖來替代肝臟功能，同時又能解決異體移植的供體來源缺乏及免疫排斥的問題，具有廣闊的應用前景。 有人在骨髓細胞中分離出一類β_2m~-／Thy-1~+細胞，具有肝細胞的一些表型如白蛋白mRNA表達，并在體外誘導分化，出現新的肝細胞表型如CAM5.2，因此這類β_2m~-／Thy-1~+細胞可能是骨髓中的“肝臟干細胞”，骨髓中肝臟干細胞還有那些肝細胞特征，有必要進一步研究。 在骨髓細胞向肝細胞的轉化實驗中，常用射線照射去除受體動物自身骨髓，使供體骨髓細胞能大量的在受體骨髓腔定居、增殖。在二乙酰 鄭州大學2002屆博士論文 骨髓細胞向肝細胞轉化的體內外實驗研究 氨基拐（2－AAF）加 CCI。肝損傷模型中，己經發(fā)現移植的骨髓細胞可以 轉變?yōu)楦渭毎?AFP用 臟前體細胞，也有人用小劑量的全身照射，證明 在無肝損傷的情況下，也有骨髓細胞向肝細胞的轉化。雖然在體內研究中， 骨髓細胞在肝臟中可以轉化為肝細胞，但其機制尚未闡明，推測細胞因子和 肝臟局部微環(huán)境起著重要作用。 本研究用3種動物模型進行交叉性別骨髓移植，探討在不同條件下， 骨髓細胞向肝細胞轉化的情況，并分析2－AAF對骨髓細胞轉化率的影響。 聯(lián)合雙向聚丙烯酚胺凝膠電泳 Q．PAGE）及質譜（MS）進行蛋臼 質組研究是目前廣泛應用的方法，這一技術可以比較不同的細胞或組織 蛋白質組的差異，對于研究細胞的分化、腫瘤、衰老具有重要意義。為 此，我們初步在本實驗室建立ZD－PAGE實驗技術，對2．AAF＋PH（部分 肝切）模型肝切前后的肝組織的總蛋白進行分離，并找出肝切前后的差 異蛋白質點，希望從中找到促使肝臟干細胞活化和骨髓干細胞向肝細胞 轉化的細胞因子。 材料 禾方法： 本實驗用免疫組化、逆轉錄PCR和 Western blot方法，對骨髓細胞甲胎 蛋自mRNA和蛋白的表達進行分析，以確定骨髓細胞中肝臟干細胞標志一甲 胎蛋白的表達情況。用逆轉錄PCR、巢式PCR和基因序列測定檢測骨髓細胞 中白蛋白mKNA表達情況。 分離大鼠骨髓單個核細胞，分3組進行培養(yǎng)：l）單純培養(yǎng)基對照組，（含 胎牛血清15％人2）大鼠肝損傷血清組（用2－＊AF十＊H肝切模型大鼠肝切后； 血清替代胎牛血清人 3）HGF組＊牛血清 1％，加肝細胞生長因子 20ng／mL人 用免疫組化、逆轉錄 PCR和 Western blot方法，以觀察大鼠肝損傷血清和 HGF 對骨髓細胞轉化的促進作用。 將雌性 SD大鼠隨機分為 3組，每組 15只。l）R＋BMT（全身照射＋ 骨髓移植＼ 2）2－AAF＋R＋BMT；3）2．AAF＋PH＋BMT。2．AAF采用灌胃 法。各組進行交叉性別骨髓細胞移植，將雄性骨髓移植入雌性受體內， 以雄性性別訣定基因 sry作為細胞標記，用原位雜交和 FISH作為檢測方 2 鄭州大學2O02屆博士論文 骨髓細胞向肝細胞轉化的體內外實驗研究 法進行骨髓細胞向肝細胞轉化的分析。 用雌性SD大鼠6只，做2－AAF＋PH模型，進行肝切前后肝臟蛋白質 ZD．PAGE電泳，分析蛋白差異。 結果顯示： 1．PCR移植效果初步分析可見，R＋BMT組門例中有 10例 PCR陽性； ZAAF＋PH＋BMT組門例中有 7例陽性，ZAAF＋R＋BMT組 10例中有 6例陽性。 2．sry原位雜交染色發(fā)現，第5大各組雌性受體肝索中均未見sry陽性的肝 細胞。 3．第 10大 R＋BMT組可見一例 Sry陽性的細胞位于肝細胞索，FISH染色可 見這一細胞白蛋白mKNA陽性。 4．第20天各組PCR陽性各例均可在肝索中檢測到Sry陽性的細胞。FISH 染色可見白蛋白mRNA陽性。 5．經統(tǒng)計學分析第20大各組Sry陽性細胞數無明顯差異（P＞0刀5人 6．AFP兔疫組化染色可見，新鮮骨髓細胞和單純 IMDM／F培養(yǎng)基組呈陰 性；肝損傷血清組和 HGF組培養(yǎng)后 10． 20天，細胞爬片 AFP免疫組化 染色陽性。 7．AFP
【學位單位】：鄭州大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2002
【中圖分類】：R575.305
【部分圖文】：

圖1一1PCR法Bio一白蛋白探針合成為未標記的PCR產物，2、4為標記后PCR產物，5A參照;白蛋白標記前為463bp。234567SO0bP250bP
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本文編號：2857614