發(fā)布時間：2020-10-26 20:13

　　 目的:肝臟是重要的糖代謝器官之一,各種慢性肝病均可能致肝功能損傷,引發(fā)糖耐量減低,甚至糖尿病的出現(xiàn),1906年Narmyn將這一類糖尿病定義為肝源性糖尿病(hepatogenous diabetes,HD)。據(jù)統(tǒng)計,慢性肝病患者中大約有約50%-80%的患者存在糖耐量異常,其中大約30%的患者最終發(fā)展為糖尿病,而正常人群中糖尿病發(fā)病率僅為8%左右。而HD的發(fā)病機制尚不明確,其臨床表現(xiàn)又受原發(fā)肝病的影響,極易被忽視。但其具體機制尚不明確。本文通過小鼠膽總管結(jié)扎建立肝硬化模型,探究肝硬化時糖代謝及胰島功能的變化、糖代謝關(guān)鍵酶活性的變化以及炎癥因子的作用。方法:選取雄性6~8周齡大小的c57BL/6小鼠60只,隨機分為6組,實驗組(A1組)10只,實驗組(A2組)10只,假手術(shù)組(B1組)10只,假術(shù)組(B2)10只,正常組(C1組)10只,正常組(C2)10只。在無菌條件下對A1、A2組小鼠打開腹腔行膽總管結(jié)扎,B1、B2組小鼠打開腹腔游離膽總管但不結(jié)扎,C1、C2組小鼠未開腹未處理膽總管。各組小鼠每周測定空腹血糖并稱取體重,觀察一般狀態(tài)及尿液、糞便顏色。于4周時將A1、B1、C1組稱取體重,測定糖耐量試驗及胰島素釋放實驗觀察胰島β細胞功能,用微板法測定血清谷草轉(zhuǎn)氨酶(aspertate aminotransferase,AST)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、甘油三酯(triglyceride,TG)、白蛋白濃度,肝臟HE、masson染色觀察是否形成肝硬化,用ELISA法測定肝組織勻漿葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)、葡萄糖6磷酸酶(glucose 6 phosphatase,G6PC)的活性,用免疫組化法觀察肝臟及胰腺是否有炎癥因子的激活、損傷;于8周時將A2、B2、C2組小鼠與4周組同樣處理。結(jié)果:實驗4周時,1)實驗A1組較B1組、C1組小鼠活動減少,耳尖及尾部明顯黃染,尿液深黃,大便顏色變淺,皮毛略失去光澤,體重明顯下降(P0.05);2)血清AST、ALT顯著升高(P0.05),TG、白蛋白、肝重、OGTT曲線下面積尚無差別(P0.05),胰島素釋放實驗曲線下面積顯著增加(P0.05),肝組織HE、masson染色可見小膽管均擴張,膽管周圍纖維條索形成,部分延伸至肝小葉,使肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂;3)肝組織勻漿GCK和G-6-PC活性尚無差別(P0.05);4)胰腺HE染色胰島數(shù)目及面積有減少趨勢,但無差別(P0.05),肝及胰腺組織NF-KB-P65和IKBα免疫組化可見部分細胞核呈棕色深染。實驗8周時,1)實驗組A2組較B2、C2組小鼠狀態(tài)萎靡,全身明顯黃染,尿液仍呈深黃色,大便呈淺白色,皮毛更無光澤,體重明顯下降(P0.01);2)血清AST、ALT明顯升高(P0.01),白蛋白顯著下降(P0.01),肝重明顯增加(P0.05),血脂仍無差別(P0.05),OGTT曲線下面積無差別(P0.05),胰島素釋放實驗曲線下面積顯著增加(P0.05),肝組織HE、masson染色可見膽管明顯擴張,周圍明顯纖維化,可見假小葉及肝細胞片狀壞死;3)肝組織勻漿G-6-PC活性顯著增高(P0.05),GCK活性有下降趨勢,但無差別(P0.05);4)胰腺HE染色可見胰島數(shù)目及面積減小(P0.05),肝及胰腺組織NF-KB-P65和IKBα免疫組化可見棕色深染細胞核增多,NF-KB-P65/IKBα比值明顯升高(P0.05)。結(jié)論:小鼠膽總管結(jié)扎建立肝硬化模型于4W出現(xiàn)胰島素抵抗,隨著肝硬化的進展,可使調(diào)節(jié)糖代謝的關(guān)鍵酶G-6-PC活性升高,并激活NF-KB信號通路,使肝臟、胰腺出現(xiàn)炎癥反應(yīng),胰島面積逐漸減少。
【學位單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

圖 9 造模術(shù)后 4 周各組小鼠體重變化驗 4 周各組小鼠體重及肝重變化的比較（ x±S）實驗組（A1） 假術(shù)組（B1） 正22.350±0.832 22.340±1.299 2220.630±1.639★＃22.880±1.135 231.330±0.106 1.210±0.159 1P<0.05 vs B1 組；＃：P<0.05 vs A1 造模前體重。鼠肝功、血脂、白蛋白的變化鼠于實驗 4 周行尾靜脈采血測定 OGTT 及胰島素分別測定肝酶 AST、ALT、TG、白蛋白濃度。實均有升高，ALT 明顯升高（P<0.01）,白蛋白及 1 均無明顯變化。上訴結(jié)果表明膽總管結(jié)扎術(shù)后

注：★：P<0.01 vs B1 組、C1 組；＃：P<0.05 vs B1 組、C1 組。2.2.3 實驗 4 周各組小鼠肝臟組織 HE 及馬松染色A1、B1、C1 3 組小鼠均于實驗 4 周心臟采血后立即切取肝臟組織浸爾馬林液中，石蠟包埋做成蠟塊，切片后分別行 HE 染色及 masson 染色察 HE 染片示：實驗組 A1 小膽管均有輕度擴張，周圍可見纖維條索，部葉，使肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，局部可見肝細胞壞死。假手術(shù)組 B1 及正常組 C索狀整齊排列，結(jié)構(gòu)完整，未見膽管擴張，無纖維化，無肝細胞壞死。masson 染色對膠原纖維可以著色，可將纖維化染成淺綠色。顯微鏡組小鼠肝臟組織肝小葉局部及膽管周圍可見著色，B1 及 C1 組小鼠肝臟齊排列，胞漿染成深紅色，未見淺綠色著色。見圖 10 至 15。上訴結(jié)果說明在實驗 4 周，實驗組肝組織已有肝小葉的破壞，膽管小葉局部有肝細胞破壞及明顯纖維條索形成。

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【參考文獻】

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本文編號：2857475