目的尋找一種方法能夠有效的去除胃粘液,把胃粘膜制備成單細胞懸液,可以進行胃粘膜流式細胞術(shù)等單細胞的蛋白分析研究,為即將在胃組織開展細胞組學做好準備,并以體外培養(yǎng)的Molt-4單細胞懸液作為參照。 方法應(yīng)用不同濃度的胃蛋白酶嘗試去除胃粘液和分離粘膜層后,再使用機械法制備成單細胞懸液,用DNA直方圖來驗證獲得單細胞的各周期比例,并和未用胃蛋白酶處理的胃粘膜組織蛋白用Western來對比周期蛋白的表達,應(yīng)用細胞免疫組織化學流式細胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡技術(shù)初步檢測胃粘膜細胞主要周期蛋白CyclinD、E、A、B1的表達。 結(jié)果0.05-0.1%的胃蛋白酶和1.2-2.4u/ml的dispase分別能夠較好的去除胃粘液,獲得粘膜層,從而制備成胃粘膜單細胞懸液,從而能夠進行單細胞分析,可以從流式中首次系統(tǒng)的顯示出其細胞主要周期蛋白的時相性表達規(guī)律:CyclinD3,B1明顯表達,CyclinD2較弱,CyclinD1,A,E表達不明顯,并得到Western和激光掃描共聚焦顯微鏡的驗證。 結(jié)論利用胃蛋白酶,dispase作用后能夠去除胃粘液,較容易獲得胃粘膜單細胞懸液,并通過應(yīng)用細胞免疫組織化學流式細胞術(shù)和激光共聚焦顯微鏡技術(shù)初步檢測胃粘膜細胞主要周期蛋白CyclinD、E、A、B1的表達,提示體內(nèi)的細胞周期蛋白的表達規(guī)律與體外培養(yǎng)的細胞系的表達規(guī)律不同。 目的用酶消化胃粘液后把胃粘膜制備成單細胞懸液,用其進行膜蛋白的提取,并和直接獲得的組織蛋白進行對比,并以體外培養(yǎng)的Hela單細胞懸液作為參照,為即將在胃組織開展細胞組學提供膜蛋白組學方面的支持。 方法應(yīng)用0.1%胃蛋白酶去除胃粘液,用1.2-2.4u/ml的dispase分離粘膜層后,再使用機械法制備成單細胞懸液,然后用Triton-114進行了膜蛋白與胞內(nèi)蛋白的分離,并用免疫印記Western技術(shù)來驗證部分膜蛋白的表達,并進行了SDS-PAGE電泳。 結(jié)果0.1%的胃蛋白酶和1.2-2.4u/ml的dispase分別能夠較好的去除胃粘液,制備成胃粘膜單細胞懸液,可以進行膜蛋白的提取。用Triton-114提取的膜蛋白經(jīng)Western驗證,可以見到膜蛋白(Na+/K+ATPase,caveolin等)的富集,可以在SDS-PAGE電泳顯示出膜蛋白條帶。 結(jié)論利用胃蛋白酶,dispase作用后能夠去除胃粘液,較容易獲得胃粘膜單細胞懸液,利用去污劑Triton-114可以嘗試進行膜蛋白的提取,可進行提膜蛋白等進行蛋白組學分析。
【學位單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2008
【中圖分類】：R573
【文章目錄】：
引言
第一部分：胃粘膜單細胞懸液的制備及其周期蛋白的表達
    1. 中文摘要
    2. 英文摘要
    3. 前言
    4. 材料和方法
    5. 實驗結(jié)果
    6. 討論
    7. 參考文獻
第二部分：胃粘膜單細胞懸液膜蛋白的初步提取
    1. 中文摘要
    2. 英文摘要
    3. 前言
    4. 材料和方法
    5. 實驗結(jié)果
    6. 討論
    7. 參考文獻
全文總結(jié)
文獻綜述
致謝

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 龔建平;從Genomics,Proteomics到Cytomics,還是從Cytometry到Cytomics[J];癌癥;2003年05期

2 李松華,連超;胃粘液與胃粘膜保護的研究進展[J];國外醫(yī)學(消化系疾病分冊);2002年01期

3 張麗軍,謝錦云,李選文,梁宋平;真核細胞質(zhì)膜蛋白質(zhì)組研究進展[J];生命科學;2005年05期

4 周鐵楊;周健;曹銳;沈建英;陳平;王賢純;;大鼠海馬細胞質(zhì)膜的分離及其蛋白質(zhì)組學分析[J];中國生物化學與分子生物學報;2006年09期

5 楊玉珍,黃曼玲,李小蘭,胡俊波,龔建平;細胞周期蛋白在胃腸癌中的表達及臨床意義[J];胃腸病學和肝病學雜志;2005年04期

6 王元忠;葛志強;元英進;;細胞組學及其在藥物研發(fā)中的應(yīng)用[J];細胞生物學雜志;2006年02期

7 熊力;李選文;葉啟發(fā);梁宋平;;肝再生過程中肝竇內(nèi)皮細胞膜蛋白質(zhì)組學研究的可行性探討[J];中國組織工程研究與臨床康復;2007年47期

8 郭勇;覃吉超;周毅;何小軍;李偉華;謝大興;龔建平;;胃腸道惡性腫瘤Cyclins表達分型與MDR1及TNM分期的關(guān)系[J];世界華人消化雜志;2006年15期

本文編號：2857108