肝纖維化、肝硬化是威脅人類健康的重大疾病，是各種慢性肝病共有的漸進性病理改變。其主要特征表現(xiàn)為以膠原為主要成分的細胞外基質(zhì)(extra-cellularmatrix,ECM)各成分合成增多、降解相對不足而過量沉積。輕者稱為纖維化，重者使肝小葉結(jié)構(gòu)改建，假小葉及結(jié)節(jié)形成，稱為肝硬化。活化的肝星形細胞(hepatic stellate cell, HSC或Ito細胞)、損傷的及再生的肝細胞、Kupffer細胞、竇內(nèi)皮細胞、自然殺傷細胞(NK細胞)等在炎癥因素、毒素等刺激下產(chǎn)生的某些免疫介質(zhì)或細胞因子,以自分泌或旁分泌方式作用于靶細胞受體發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng),構(gòu)成肝纖維化的主要細胞學(xué)基礎(chǔ)。肝纖維化的形成過程不是靜止的，而是不斷變化的動態(tài)過程，近年的研究還表明，肝纖維化在一定情況下是可以逆轉(zhuǎn)的，對逆轉(zhuǎn)因素的研究將為進一步了解肝纖維化和肝硬化的發(fā)生機制提供重要線索。 肝纖維化的形成是一個多因素、多細胞參與的復(fù)雜過程，其中細胞因子網(wǎng)絡(luò)始終是人們的研究熱點，結(jié)締組織生長因子（connective tissue growth factor,CTGF）是一種新發(fā)現(xiàn)的細胞因子，被視為轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)的下游反應(yīng)元件, 在 TGF-(1的誘導(dǎo)下，CTGF可由成纖維細胞等間質(zhì)細胞產(chǎn)生，反過來又介導(dǎo)TGF-(1對間質(zhì)細胞的作用，具有促進成纖維細胞增殖以及參與細胞外基質(zhì)(ＥＣＭ)產(chǎn)生、積聚等功能，這在多種纖維化疾患的研究中已得到證實。在肝纖維化的體內(nèi)和體外實驗研究中，CTGF對肝星狀細胞的分化增殖具有很強的調(diào)控作用，CTGF的異常高表達在肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用，已成為肝纖維化新的研究熱點。 本實驗在小鼠四氯化碳(ＣＣｌ4)肝維化模型上, 采用RT-PCR和免 WP=96 疫組織化學(xué)方法檢測了38只實驗性肝纖維化小鼠肝臟中CTGF表達水平，并與I、III型膠原進行比較，觀察CTGF-mRNA在實驗性肝纖維化小鼠肝臟中的表達改變并探討其意義。另一部分研究內(nèi)容為制備模型開始及4周起分別應(yīng)用CTGF抗體、天晴復(fù)欣預(yù)防和治療肝纖維化，與正常對照組、染毒組及丹參組相比較，觀察各組血清學(xué)指標、肝功能情況、氧化-抗氧化指標、肝組織羥脯氨酸含量、病理纖維化程度分級及CTGF、I、III型膠原水平變化，旨在為臨床防治肝纖維化提供依據(jù)。 所得結(jié)果如下： ⑴ 肝纖維化小鼠肝組織中CTGF基因表達水平及蛋白質(zhì)分子表達水平顯著高于正常組小鼠（p0.01）。 ⑵ 所有實驗組動物肝組織切片中I、III型膠原含量均顯著高于正常對照組（P0.05 ～ P0.01）。 ⑶ CTGF表達量、I、III型膠原含量均與小鼠肝纖維化程度成正比，其r值分別為0.582、0.351、0.374，其中以CTGF的相關(guān)性最高（P0.01），其次為III、I型膠原（P0.05）。 ⑷ CTGF表達量與與COL-I和COL-Ⅲ的表達量成正比，其中CTGF與COL-Ⅲ,Ｐ0 05與COL-I,Ｐ0 01。 ⑸ 肝功能指標：各治療組ALT、白蛋白和TBil與模型組比較均有顯著改善 （P0.05 ～ P0.01）。其中天晴復(fù)欣預(yù)防組、CTGF抗體組較丹參組更為顯著，天晴復(fù)欣預(yù)防組好于治療組（Ｐ0 05）。 ⑹ 血清肝纖維化指標：各治療組血清中HA、LN、PC-Ⅲ 、IV-CL水平與模型組比較均有顯著降低 （P0.05 ～ P0.01）。 其中天晴復(fù)欣預(yù)防組、CTGF抗體組較丹參組更為顯著，天晴復(fù)欣預(yù)防組好于治療組（Ｐ0 05）。 ⑺ 氧化-抗氧化指標：各治療組SOD、GST-PX顯著高于模型組（P0.05 ～ P0.01），而MDA較模型組顯著減低（P0.05 ～ P0.01）。其中天晴復(fù)欣預(yù)防組、CTGF抗體組較丹參組更為顯著，天晴復(fù)欣預(yù)防組好于治療組（Ｐ0 05）。 ⑻ 羥脯氨酸含量測定：各治療組羥脯氨酸含量(μｇ/ｍｇ) 較模型組顯著減低（P0.05 ～ P0.01）。其中天晴復(fù)欣預(yù)防組、CTGF抗體 WP=97 組較丹參組更為顯著，天晴復(fù)欣預(yù)防組低于治療組，但兩者無統(tǒng)計學(xué)意義。 ⑼ 病理組織學(xué)觀察： CTGF抗體和天晴復(fù)欣的預(yù)防組、治療組肝纖維化程度明顯輕于染毒對照組及丹參組（p0.01，p0.05），CTGF抗體組與天晴復(fù)欣組之間及預(yù)防和治療組之間各項指標無顯著差異。 ⑽ 丹參預(yù)防組、天晴復(fù)欣預(yù)防、天晴復(fù)欣治療組及CTGF抗體組與CCl4模型組相比較，肝組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原及CTGF的含量有顯著性降低（P 0.05～P0.01）；天晴復(fù)欣預(yù)防組、天晴復(fù)欣治療組、CTGF抗體組與丹參治療組相比較，肝組織中Ⅰ、Ⅲ型膠原及CTGF的含量有顯著性降低（P 0.05）；天晴復(fù)欣預(yù)防組與治療組相比較，前者較后者Ⅰ、Ⅲ型膠原及CTGF的含量有顯著性降低（P 0.05）；天晴復(fù)欣預(yù)防組與CTGF抗體組相比各指標差異無顯著性（P﹥0.05）。 上述結(jié)果提示： ⑴ CTGF在肝纖維化激活及調(diào)控中具有重要作用。 ⑵ 采用CTGF抗體封閉CTGF功能可能在肝纖維化防治中有重要作用。 ⑶ 進一步驗證了天晴復(fù)欣抗肝纖維化的作用。 本研究的創(chuàng)新點及意義： ⑴ 首次應(yīng)用RT-PCR及免疫組化方法檢測了實驗性肝纖維化小鼠肝臟中CTGF的表達。CTGF在肝纖維化組織中出現(xiàn)高表達,并與病理上肝纖維化程度相互平行,表現(xiàn)出與肝纖維化的發(fā)生發(fā)展極其密切的關(guān)系。但其確切的病理學(xué)機制目前尚不完全清楚，仍需進一步研究，而CTGF的受體和CTGF對細胞外基質(zhì)合成影響的信號傳遞機制以及抗CTGF的治療策略將成為未來重要的研究方向。
【學(xué)位單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位年份】：2004
【中圖分類】：R575.2
【部分圖文】：

正常小鼠肝組織（HE染色，10×）

正常小鼠肝組織（Masson染色，10×）

給CCI4后3W，纖維組織包繞分割肝小葉（HE染色，10×）
【參考文獻】

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本文編號：2856391